1、　　目的：本研究的目的是建立一個哺乳動物細胞表達系統(tǒng),能夠高效表達外源目的蛋白,為將來應用于表達藥用重組蛋白提供基礎：對CHO細胞表達系統(tǒng)表達外源蛋白的上游轉染、篩選條件和檢測方法進行探索和優(yōu)化,并構建適用于CHO細胞大規(guī)模表達的、能提高外源蛋白表達效率的通用載體,并對該載體進行初步的檢測。
　　方法：本研究對CHO細胞株的脂質體轉染條件和G418篩選條件進行優(yōu)化研究、并用基因組PCR、RT-PCR、dot-ELISA、間接ELI

2、SA、細胞免疫熒光和MTT法對由該CHO表達系統(tǒng)表達的分泌型蛋白如分泌型bFGF的表達進行檢測；根據(jù)文獻報道,通過半巢式PCR方法,從CHO基因組中分離出抗阻遏子元件,克隆到pIRESneo3載體真核轉錄本的兩側,構建成一個通用載體,然后采用分泌型bFGF、綠色熒光蛋白等作為報道基因,通過篩選后克隆計數(shù)、MTT測活法和熒光強度對比等方法對該表達載體進行初步的研究和檢測。
　　結果：24孔板中CHO/dhfr-的最佳轉染條件為脂質體

3、2μg和DNA2μl,G418最佳篩選條件為500μg/ml；轉染后,檢測到外源基因整合到基因組,并檢測到該基因的轉錄,MTT法間接檢測到該基因的分泌表達：從CHO細胞基因組中分離得到的抗阻遏子元件與文獻報道有97%同源；成功構建了pInAR2質粒載體,檢測到抗阻遏子元件對外源基因的表達有增強作用。
　　結論：本研究對CHO細胞表達系統(tǒng)高效表達外源蛋白進行了初步的研究和條件的確立；構建了一個含有抗阻遏子元件的質粒型通用載體,該載體