1、RNA干擾(RNA interference，簡(jiǎn)稱RNAi)是雙鏈RNA分子在mRNA水平上誘發(fā)的序列特異性的轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)沉默。建立RNAi文庫，進(jìn)行系統(tǒng)性、大規(guī)模的篩選工作是進(jìn)行功能基因組學(xué)研究的有力工具?；瘜W(xué)合成方法獲得小干擾RNA(small interference RNA，簡(jiǎn)稱siRNA)成本昂貴，因此構(gòu)建可擴(kuò)增的siRNA載體文庫意義重大。本研究旨在構(gòu)建一個(gè)針對(duì)特定人類基因的siRNA表達(dá)質(zhì)粒文庫。文庫構(gòu)建采用了雙啟動(dòng)子型

2、siRNA表達(dá)載體pBUH。本文中，應(yīng)用紅—綠色熒光蛋白雙報(bào)告基因系統(tǒng)進(jìn)行的基因表達(dá)水平研究表明，pBUH質(zhì)?？梢杂行П磉_(dá)針對(duì)綠色熒光蛋白(Enhanced Green Fluorescence Protein，簡(jiǎn)稱EGFP)基因的siRNA，使EGFP基因表達(dá)水平明顯下降。本研究成功克隆了300個(gè)siRNA序列的表達(dá)質(zhì)粒(每個(gè)質(zhì)粒保存了3個(gè)克隆)；并為篩選參與STS(Staurosporine)誘導(dǎo)凋亡通路的相關(guān)基因進(jìn)行了初步準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)