1、馬氏珠母貝（Pinctada martensii Dunker）又稱合浦珠母貝，是我國生產(chǎn)海水珍珠的重要經(jīng)濟貝類之一，既可作肉貝又可用于生產(chǎn)海水珍珠，生產(chǎn)的南海珍珠享譽世界。而近年來，由于環(huán)境條件惡化及不科學(xué)的養(yǎng)殖繁育方式等導(dǎo)致種質(zhì)資源嚴重退化，珍珠產(chǎn)量及質(zhì)量下降，企業(yè)經(jīng)濟受損嚴重，因此迫切需要對馬氏珠母貝進行遺傳多樣性分析，優(yōu)化選育、遺傳改良、分子標記選育及保護其種質(zhì)資源等方面的研究。本研究采用EST-SSR微衛(wèi)星標記技術(shù)、相關(guān)序列擴

2、增多態(tài)性標記技術(shù)(SRAP-cDNA)、單核苷酸多態(tài)性標記(SNP)技術(shù)等分析了四種殼色馬氏珠母貝群體的遺傳多樣性、篩選出殼色相關(guān)分子標記和殼色相關(guān)基因酪氨酸酶基因的SNP位點及在四種殼色群體中的表達量差異。旨在為經(jīng)過8代的群體繼代選育獲得的四種殼色馬氏珠母貝群體的種質(zhì)鑒定和殼色選育提供分子理論依據(jù)。
　　主要研究結(jié)果如下:
　　1、本研究采用10對微衛(wèi)星引物，對四種殼色馬氏珠母貝群體的遺傳多樣性和群體結(jié)構(gòu)進行了研究，結(jié)果顯

3、示:(1)10個位點共檢測到45個等位基因，各位點平均等位基因數(shù)4.5個，四種殼色馬氏珠母貝群體的平均等位基因（Na）為3.5～4.0，平均有效等位基因數(shù)(Ne)為2.288～2.730，平均觀測雜合度（Ho）為0.445～0.627，平均期望雜合度（He）范圍是:0.479～0.580，平均多態(tài)信息含量(PIC)為0.423-0.509，四種殼色馬氏珠母貝群體遺傳多樣性大小依次是紅殼色＞白殼色＞黑殼色＞黃殼色;(2)有3個位點極顯著偏

4、離哈迪溫伯格平衡(P＜0.01)，2個位點顯著偏離哈迪溫伯格平衡（P＜0.05），其余位點在在不同殼色群體中發(fā)生不同程度的偏離，平均遺傳分化指數(shù)(Fst)值為1.206，平均基因流（Nm）指數(shù)1.8825，遺傳分化程度中等，沒有發(fā)生基因流動。遺傳距離(Dxy)值范圍為0.1742～0.3415，遺傳相似度(Nei's)范圍0.7107～0.8418，與F3代和F5代殼色選育系的相比，四種殼色馬氏珠母貝群體遺傳多樣性降低，遺傳變異程度和遺

5、傳距離增大，遺傳結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，群體趨于純化，形成四種殼色馬氏珠母貝新品系。
　　2、采用SRAP-cDNA技術(shù)對四種殼色馬氏珠母貝群體的外套膜基因的表達差異進行分析。研究結(jié)果表明:100對SRAP引物組合，共篩選到5條差異條帶，克隆獲得8條序列。經(jīng)過Blastx程序比對，獲得5個相似蛋白序列，1個假定蛋白、2個HMP-P合酶和2個Rossman折疊NAD(P)(+)結(jié)合蛋白。本實驗獲得了3個紅殼色馬氏珠母貝群體標記，引物17-1差

6、異條帶、引物17-2差異條帶和引物28差異條帶，2個黃殼色馬氏珠母貝群體引物標記，引物41差異條帶和引物70差異條帶。它們分別可作為鑒定紅、黃殼色馬氏珠母貝新品系的分子標記，為其種質(zhì)鑒定提供分子理論基礎(chǔ)。
　　3、采用SNP分子標記技術(shù)，在四種殼色馬氏珠母貝群體酪氨酸酶基因編碼片段的887bp-1571bp之間，共篩選出22個SNP突變位點，3個缺失位點，平均每100個堿基序列中就有3.6個堿基發(fā)生突變。944bp缺失A、945b

7、p缺失C、946bp缺失C，缺失后的序列重新組合后與NCBI數(shù)據(jù)庫中的酪氨酸酶基因序列相比，正好缺失了一個脯氨酸。22個SNP位點均為二等位基因型，6個非同義突變，16個同義突變，14個轉(zhuǎn)換，8個顛換。研究結(jié)果顯示:(1)四種殼色馬氏珠母貝群體與NCBI數(shù)據(jù)庫中克隆酪氨酶基因的馬氏珠母貝群體有明顯差異，不是同一群體。(2)經(jīng)多重比較發(fā)現(xiàn)，不同SNP位點在四種殼色馬氏珠母貝群體中具有不同程度的顯著差異性。篩選獲得14個SNP位點可作為鑒定

8、紅殼色群體的分子標記。白殼色與黑殼色群體鑒定標記有6個。白殼色與黃殼色群體鑒定標記有3個。黑殼色與黃殼色群體鑒定標記有1個。這幾個分子標記可用本課題組選育的四種殼色馬氏珠母貝群體的種質(zhì)鑒定。(3)22個SNP位點在四種殼色群體中信息多態(tài)性(PIC)范圍:0.012～0.3749，平均值是0.2922，20個位點極顯著偏離哈迪溫伯格平衡（P＜0.01）。遺傳多樣性較低，群體殼色純化程度較高。(4)四種殼色馬氏珠母貝群體的酪氨酸酶基因相對表