1、目的：癲癇是人類一種慢性腦功能障礙綜合癥，其發(fā)病機(jī)制和治療研究一直是醫(yī)學(xué)上的難題。近幾年研究顯示星形膠質(zhì)細(xì)胞的改變與癲癇發(fā)病密切相關(guān)。本研究以馬桑內(nèi)酯為致癇劑，制備Sprague Dawley(SD)大鼠急性癲癇模型，對比觀察癲癇模型組和妥泰治療組星形膠質(zhì)細(xì)胞活性及超微結(jié)構(gòu)變化，探討妥泰對星形膠質(zhì)細(xì)胞的影響，為了解星形膠質(zhì)細(xì)胞與癲癇的關(guān)系，提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：將成年雄性SD大鼠(250g-300g)40只，隨機(jī)分成4組：正常對

2、照組、生理鹽水組、癲癇模型組和妥泰治療組，每組10只。正常對照組未給予任何干預(yù)措施直接固定取材；癲癇模型組和妥泰治療組用馬桑內(nèi)酯為致癇劑(1μl/100g)制作急性癲癇模型；生理鹽水組用相同劑量的生理鹽水替代致癇劑。觀察癲癇模型表現(xiàn)以確定模型是否制作成功。妥泰治療組用妥泰灌胃治療7天(25 mg/100g)，1次/日；癲癇模型組和生理鹽水組也用相同劑量的生理鹽水替代妥泰灌胃7天。以40g/L的多聚甲醛灌注固定后取大腦中央前回，常規(guī)脫水、

3、包埋、石蠟切片(片厚4 μm)，對星形膠質(zhì)細(xì)胞做神經(jīng)膠質(zhì)酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAp)(1：150)免疫組織化學(xué)染色，對照大鼠腦圖譜定位于大腦皮層中央前區(qū)，采用Ax70顯微成像系統(tǒng)，關(guān)閉自動白平衡功能并保持相同的光源、光學(xué)條件，在此區(qū)域內(nèi)隨機(jī)照5張片，用ImagePro-Plus 6.0(IPP6.0)圖像分析軟件分析，測得每張照片中陽性細(xì)胞數(shù)量、平均光密度(average opti

4、cal，AO)和積分光密度(integrated optical density，IOD)，取同一指標(biāo)5張照片的平均值為該指標(biāo)一例標(biāo)本的代表值。每張標(biāo)本均依此法在相同區(qū)域照像，測得4組共200例標(biāo)本的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)均以-X±S表示；樣本經(jīng)戊二醛后固定，丙酮脫水，樹脂618包埋，超薄切片后于10000倍下隨機(jī)選擇神經(jīng)氈?jǐn)z片，每例標(biāo)本攝5張，共200張照片，同樣用IPP 6.0圖像分析軟件分析，測神經(jīng)氈內(nèi)膠質(zhì)細(xì)胞突起和神經(jīng)元突起的面積分?jǐn)?shù)和單位面

5、積(64μm2)內(nèi)膠質(zhì)細(xì)胞胞體的切面數(shù)(面數(shù)密度)，匯總結(jié)果均以(-x)±S表示。通過SPSS15.0統(tǒng)計(jì)分析軟件包對免疫組化和電鏡測得的各組數(shù)據(jù)分別作正態(tài)分布檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)，以單因素方差分析(one-way ANOVA)統(tǒng)計(jì)結(jié)果，并用Bonferrioni法做多組數(shù)據(jù)間兩兩比較。 結(jié)果： ①動物行為觀察，癲癇模型大鼠在注射致癇劑后5～15 min內(nèi)開始出現(xiàn)癲癇發(fā)作，60 min后動物癲癇發(fā)作均達(dá)到Ⅲ級或以上(Rac

6、ine分級)。 ②GFAP免疫組化顯示：被染成棕色的GFAP陽性物質(zhì)存在于星形膠質(zhì)細(xì)胞胞漿，并呈現(xiàn)出整個細(xì)胞的輪廓及突起，胞核被蘇木素染為深藍(lán)色，核小居于細(xì)胞中央。神經(jīng)元胞核被染成淺藍(lán)色，核大，核仁核膜清晰可見，與星形膠質(zhì)細(xì)胞胞核有明顯區(qū)別。正常組星形膠質(zhì)細(xì)胞較少，突起短；生理鹽水組與正常組相似，其GFAP陽性細(xì)胞數(shù)量、AO及IOD與正常組相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；模型組變化較明顯，可見星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量增多、細(xì)胞腫大、

7、突起增多，呈明顯的星形，與正常組相比其細(xì)胞數(shù)量及IOD有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；治療組星形膠質(zhì)細(xì)胞腫大較模型組略減輕，突起減少，與模型組相比其GFAP陽性細(xì)胞數(shù)量及IOD有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與正常組相比細(xì)胞數(shù)量及IOD有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 ③透射電鏡結(jié)果，正常組星形膠質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)較少，細(xì)胞器不發(fā)達(dá)，基質(zhì)較疏松，著色均勻，有疏松分布的核糖體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，線粒體數(shù)量多，體積小，可見溶酶體。神經(jīng)氈內(nèi)有無髓神經(jīng)纖維、有

8、髓神經(jīng)纖維和大量的星形膠質(zhì)細(xì)胞突起。正常對照組與生理鹽水組相比細(xì)胞突起的面積分?jǐn)?shù)和面數(shù)密度無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。模型組與正常組相比星形膠質(zhì)細(xì)胞胞體因腫脹而增大，細(xì)胞質(zhì)電子密度明顯低而清亮，線粒體和溶酶體腫脹。神經(jīng)氈內(nèi)膠質(zhì)細(xì)胞突起明顯并有增粗，其終末部分變尖，細(xì)胞外間隙縮小，神經(jīng)元的胞突及有髓神經(jīng)纖維和無髓神經(jīng)纖維改變不明顯，細(xì)胞突起的面積分?jǐn)?shù)和面數(shù)密度均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)，其面數(shù)密度比正常組減少。治療組細(xì)胞電子密度明顯

9、增高，胞質(zhì)及突起腫脹明顯減輕，細(xì)胞突起的面積分?jǐn)?shù)和面數(shù)密度均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其面數(shù)密度比模型組增大。 結(jié)論： ①馬桑內(nèi)酯誘導(dǎo)的急性癲癇動物模型為一種較為可靠的癲癇模型制作方法。 ②癲癇發(fā)作狀態(tài)下，GFAP陽性細(xì)胞增多，細(xì)胞內(nèi)GFAP表達(dá)增強(qiáng)，電鏡下星形膠質(zhì)細(xì)胞的突起腫脹、增生，提示星形膠質(zhì)細(xì)胞受癲癇影響反應(yīng)性增加，星形膠質(zhì)細(xì)胞處于激活狀態(tài)。 ③妥泰對癲癇狀態(tài)下的星形膠質(zhì)細(xì)胞有保護(hù)作用，可使G