1、目的：通過(guò) DEN2感染髓樣分化因子88（Myeloid Differentiation Factor88，MyD88）沉默的小鼠骨髓來(lái)源樹(shù)突狀細(xì)胞（Bone Marrow-derived Dendritic Cells，BMDC），分析MyD88在DEN2感染BMDC后對(duì)其成熟及相關(guān)炎癥因子分泌的影響。
　　方法：利用rmIL-4、rmGM-CSF聯(lián)合誘導(dǎo)培養(yǎng)BMDC，通過(guò)細(xì)胞染色及流式細(xì)胞術(shù)鑒定；針對(duì) BMDC MyD88基因

2、，設(shè)計(jì)并合成3對(duì) MyD88 siRNA，脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染 BMDC；通過(guò)Western blot篩選一對(duì)高沉默效率的MyD88 siRNA；常規(guī)方法增殖及鑒定DEN2；直接免疫熒光及 RT-PCR鑒定 DEN2吸附 BMDC；流式細(xì)胞術(shù)分析對(duì)照組、感染組、RNAi組、感染 RNAi組、無(wú)義 RNAi組 BMDC膜表面分子 CD86、MHC-II的表達(dá)，雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)上清液中IP-10、TNF-α及IFN-α的分泌水平。

3、　　結(jié)果：
　　1.聯(lián)合誘導(dǎo)培養(yǎng)至第5d后的BMDC具有典型的DC形態(tài)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) CD11c、CD86和MHC-II分子的表達(dá)百分率分別為70.85±2.66％、28.21±5.21%、44.69±3.88%，為相對(duì)未成熟的BMDC。
　　2.與空白對(duì)照組相比，序列1、2、3組的MyD88蛋白質(zhì)表達(dá)率分別降低60.8%、78.9%、81.9%；其中序列3的沉默效率最高，具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　3

4、. DEN2可吸附BMDC，與對(duì)照組比較，感染組DC膜表面分子CD86表達(dá)降低，MHC-II分子增高。與正常對(duì)照組比較，DEN2感染RNAi組BMDC的MHC-II分子表達(dá)無(wú)明顯變化，而共刺激分子 CD86表達(dá)增高。DEN2感染RNAi組與無(wú)義RNAi組比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與RNAi組比較，DEN2感染RNAi組細(xì)胞表達(dá)CD86及MHC-II無(wú)明顯變化。
　　4. DEN2感染組與對(duì)照組比較，TNF-α、IFN-α

5、及IP-10的水平均增高。與正常組相比，無(wú)義RNAi組DC分泌的IP-10及TNF-α的水平增高，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與對(duì)照組比較，感染RNAi組IP-10、IFN-α無(wú)明顯變化，而TNF-α分泌增加，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與RNAi組比較，感染RNAi組IP-10及IFN-α水平無(wú)變化，TNF-α水平有所增高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.76）。
　　結(jié)論：
　　1.DEN2可吸附BMDC，并促使其成熟及