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文檔簡介
1、目的:通過體外培養(yǎng)的人蛻膜細胞,經(jīng)不同濃度脂多糖(LPS)作用后,研究蛻膜細胞中的炎性因子IL-1β的表達差異,以探討LPS與IL-1β對自然流產(chǎn)的影響及發(fā)病機理。
方法:收集正常早孕期人工流產(chǎn)術中的蛻膜組織,進行體外原代細胞培養(yǎng),用免疫熒光技術檢測胎盤泌乳素鑒定蛻膜基質(zhì)細胞。當蛻膜細胞培養(yǎng)至4、5代后將其分成5組,分別加入含有不同濃度脂多糖的培基使其終濃度分別(0ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、100ng/m
2、l、200ng/ml)處理細胞24小時后,依次分為對照組、實驗一組、實驗二組、實驗三組、實驗四組。1.通過激光共聚焦-免疫熒光技術檢測IL-1β蛋白在蛻膜細胞中的表達2.采用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應法(RT-PCR)檢測各組中IL-1β mRNA的表達水平,分析各組間的表達有無統(tǒng)計學差異。
結果:1.成功培養(yǎng)人原代蛻膜細胞,經(jīng)免疫熒光檢測蛻膜細胞中的胎盤泌乳素,結果顯示其陽性率為95%。2.通過激光共聚焦-免疫熒光染色技術
3、檢測各組人蛻膜細胞,細胞質(zhì)及細胞核中均有IL-1β蛋白表達,且加入不同濃度LPS后各實驗組與對照組相比,IL-1β表達差異顯著,P<0.05,有統(tǒng)計學意義。3.不同濃度LPS作用于蛻膜細胞后,各實驗組與對照組相比較,IL-1β mRNA表達有顯著差異,P<0.05,有統(tǒng)計學意義;且隨著LPS濃度的增加,IL-1β表達逐漸增強。
結論:
1.LPS作用于體外培養(yǎng)的人蛻膜細胞后,IL-Iβ的蛋白表達增加,且隨著L
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