1、研究背景：
　　卵巢癌是發(fā)生于卵巢組織的惡性腫瘤，占所有婦科惡性腫瘤的15％左右，僅次于宮頸癌，而死亡率卻位居第一。卵巢癌由于起病隱匿、早期不易發(fā)現(xiàn)，75％卵巢癌患者確診時(shí)已發(fā)生轉(zhuǎn)移[1,2]。因此，更好的了解卵巢癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制對(duì)其早期診斷、早期治療有著重要意義。
　　Notch信號(hào)通路是一條高度保守的決定細(xì)胞命運(yùn)的信號(hào)通路[3]，其受體和配體是通過細(xì)胞間的相互作用調(diào)節(jié)細(xì)胞功能的I型跨膜蛋白[3,4]。在哺乳動(dòng)物中，N

2、otch信號(hào)通路包括四個(gè)受體（Notch1-Notch4）和5個(gè)配體（Jagged-1,Jagged-2,Delta-like-1,Delta-like-3 and Delta-like-4and）[5]，相鄰細(xì)胞受體及配體之間相互作用誘導(dǎo)γ分泌酶介導(dǎo)的蛋白水解酶的釋放導(dǎo)致Notch胞內(nèi)段(NICD)的斷裂[6]，活化的NICD可進(jìn)入細(xì)胞核與轉(zhuǎn)錄抑制因子CBF1結(jié)合，最終導(dǎo)致Hes、Hey等靶基因的釋放[7,8]，Notch信號(hào)通路及其

3、下游目的基因在細(xì)胞增值、分化、凋亡過程中有著重要作用[3]。
　　異常表達(dá)的Notch信號(hào)蛋白與多種惡性腫瘤的發(fā)生有關(guān)[9,10]。Notch1表現(xiàn)為癌基因或抑癌基因取決于細(xì)胞的類型，它在鼠類皮膚腫瘤及非小細(xì)胞性肺癌中表現(xiàn)為抑癌基因作用[11,12]；而在許多其他腫瘤，如腎癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌中表現(xiàn)為癌基因作用[13]。最新文獻(xiàn)報(bào)道，Notch3及其目的基因Pbx1在卵巢癌中起癌基因作用[14,15]；Notch1在卵巢癌

4、患者腹水中有表達(dá)，并有促癌作用[16,17]。這些表明，Notch信號(hào)通路在卵巢癌的發(fā)生過程中可能起癌基因作用。Notch信號(hào)蛋白與卵巢癌的關(guān)系是一個(gè)新的研究領(lǐng)域，也為卵巢癌的基因治療提供了新的思路。
　　目的：
　?。?）探討Notch1在卵巢癌形成和轉(zhuǎn)化過程中的表達(dá)特點(diǎn)及其與卵巢癌的臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系；
　?。?）檢測卵巢癌細(xì)胞系A(chǔ)2780,SKOV3,HO-8910,HO-8910PM和卵巢上皮細(xì)胞IOSE14

5、4中Notch1及下游基因hes1的表達(dá)，篩選Notch1信號(hào)蛋白高表達(dá)的細(xì)胞系，為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)；
　?。?）檢測γ-分泌酶抑制劑DAPT阻斷Notch信號(hào)通路后Notch1及hes1基因的變化情況及對(duì)卵巢癌細(xì)胞A2780生長、凋亡等生物學(xué)行為的影響，為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)；
　?。?）檢測γ-分泌酶抑制劑DAPT下調(diào)Notch信號(hào)通路對(duì)卵巢癌鉑類耐藥的影響。
　　方法：
　?。?）采用免疫組

6、織化學(xué)SP染色法、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）及Western blotting檢測109例卵巢癌（其中65例為單側(cè)卵巢癌）、65例單側(cè)卵巢癌患者健側(cè)卵巢（配對(duì)對(duì)照）及48例正常卵巢組織（正常對(duì)照）中Notch1的表達(dá)，采用SPSS14.0軟件的卡方檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行分析。
　　（2）采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）及Western blotting檢測四株卵巢癌細(xì)胞（A2780,SKOV3,HO-8910,HO-891

7、0PM）及一株卵巢上皮細(xì)胞（IOSE144）中Notch1及其下游基因hes1的表達(dá)情況；采用MTT、流式細(xì)胞術(shù)、ELISA及克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測γ-分泌酶抑制劑DAPT下調(diào)Notch信號(hào)通路對(duì)卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。
　?。?）采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）及Westernblotting檢測γ-分泌酶抑制劑DAPT處理卵巢癌鉑類耐藥細(xì)胞A2780/CP70后Notch信號(hào)通路下游基因hes1的變化情況，采用MTT、流式

8、細(xì)胞術(shù)、ELISA及克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測DAPT聯(lián)合順鉑（Cis-DDP）對(duì)卵巢癌鉑類耐藥細(xì)胞A2780/CP70生物學(xué)行為的影響。
　　結(jié)果：
　?。?）Notch1在卵巢癌中的表達(dá)與卵巢癌的組織分化程度及FIGO分期相關(guān)（P﹤0.05），而與年齡、家族史、腫瘤位置、有無腹水、有無周圍組織浸潤、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理類型差異無顯著性（P＞0.05）；
　?。?）Notch1及其下游hes1基因在卵巢癌細(xì)胞A2780中高表達(dá)

9、；
　?。?）DAPT能抑制卵巢癌細(xì)胞A2780Notch1及hes1的表達(dá)，并呈時(shí)間、劑量依賴性；
　?。?）DAPT下調(diào)Notch1表達(dá)可抑制A2780細(xì)胞生長并誘導(dǎo)細(xì)胞G1期阻滯；
　?。?）DAPT下調(diào)Notch1表達(dá)可誘導(dǎo)A2780細(xì)胞凋亡；
　?。?）DAPT能下調(diào)卵巢癌鉑類耐藥細(xì)胞A2780/CP70Notch信號(hào)通路下游hes1基因的表達(dá)；
　?。?）DAPT能促進(jìn)Cis-DDP誘導(dǎo)細(xì)胞生長

10、抑制；
　?。?）DAPT聯(lián)合Cis-DDP用藥能誘導(dǎo)卵巢癌鉑類耐藥細(xì)胞A2780/CP70細(xì)胞G2期阻滯；
　　（9）DAPT能促進(jìn)Cis-DDP誘導(dǎo)卵巢癌鉑類耐藥細(xì)胞A2780/CP70凋亡。
　　結(jié)論：
　　（1）Notch1在卵巢癌組織中的表達(dá)與卵巢癌組織分化程度及FIGO分期相關(guān)，臨床分期越高、分化程度越低，Notch1的表達(dá)越低；反之，Notch1的表達(dá)越高，可能與其惡性程度有關(guān)。
　?。?）N

11、otch1及其下游hes1基因在多種卵巢癌細(xì)胞系中均有表達(dá)，且在A2780細(xì)胞系中表達(dá)較高，可選A2780細(xì)胞作為靶細(xì)胞進(jìn)行更深入的研究。
　?。?）DAPT可下調(diào)A2780細(xì)胞Notch1及其下游hes1的表達(dá)，并呈現(xiàn)時(shí)間和劑量依賴性；同時(shí)可引起A2780細(xì)胞生長抑制、細(xì)胞克隆數(shù)減少，并引起細(xì)胞G1期阻滯；還能引起A2780細(xì)胞凋亡，并呈時(shí)間依賴性，γ-分泌酶抑制劑DAPT可能成為卵巢癌治療的一個(gè)新靶點(diǎn)。
　?。?）DAP

12、T阻斷Notch信號(hào)通路可增強(qiáng)卵巢癌鉑類耐藥細(xì)胞A2780/CP70對(duì)Cis-DDP的敏感性，協(xié)同低劑量Cis-DDP誘導(dǎo)A2780/CP70細(xì)胞生長抑制及凋亡，DAPT-順鉑聯(lián)合用藥可能成為卵巢癌治療的一個(gè)新靶點(diǎn)。
　　本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,Notch1及其下游hes1基因在卵巢癌組織及細(xì)胞系中均有表達(dá)，提示Notch信號(hào)通路可能是卵巢癌發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制之一；γ-分泌酶抑制劑DAPT下調(diào)Notch信號(hào)通路可抑制卵巢癌A2780細(xì)胞生長