1、鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文Notch1蛋白在人食管鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)的研究姓名：高媛申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：鄢文海20070501鄭州人學(xué)2 0 0 7 屙碗I ：學(xué)位論文 中文摘蔓材料與方法腫瘤標(biāo)本：3 5 例食管鱗癌、1 6 例原位癌及3 5 例癌周正常食管粘膜上皮組織，全部取自河南省安陽(yáng)市腫瘤醫(yī)院住院病人的新鮮手術(shù)標(biāo)本，經(jīng)食管鏡活檢或手術(shù)切除后病理檢查確診為食管鱗狀細(xì)胞癌，所有病人術(shù)前未進(jìn)行放、化治療。免疫組織

2、化學(xué)：用免疫組化方法檢測(cè)不同病理特征的3 5 例食管鱗癌、1 6 例原●位癌及3 5 例癌周正常食管粘膜上皮組織N o t c h l 蛋白表達(dá)的變化。新鮮食管癌高發(fā)區(qū)手術(shù)標(biāo)本，石蠟包埋后連續(xù)切片，厚4 u m ，所有標(biāo)本均進(jìn)行H E 染色。N o t c h l特異性抗體購(gòu)自S a n t a C m z 公司，稀釋濃度為1 ：2 0 0 ，枸櫞酸鈉溶液內(nèi)抗原熱修復(fù)。二氨基聯(lián)苯胺( D A B ) 顯色后經(jīng)蘇木精復(fù)染。用P B S 做

3、陰性對(duì)照。結(jié)果的評(píng)定采用陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和染色深度分別評(píng)定，最后綜合評(píng)定的方法。實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)用S P S S I O ．0 進(jìn)行分析，以d = O ．0 5 作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。W e s t e r n - b l o t ：選取5 例食管鱗癌組織標(biāo)本及相應(yīng)癌周正常組織，用W e s t e r n —b l o t 檢測(cè)N o t c h l 蛋白表達(dá)的差異。R T - P C R ：采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)( R T - P C R )

4、從m R N A 水平上對(duì)以上選取的5 例食管鱗癌組織及對(duì)應(yīng)的癌周正常組織中N o t c h l 的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)?？俁 N A 的提取采用T r i z o l 試劑法，成功提取R N A 后即刻進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，將c D N A 產(chǎn)物一2 0 。C 保存，并進(jìn)行P C R 擴(kuò)增，所用引物均由P r i m e r 5 ．O 設(shè)計(jì)，并由上海生工合成。P C R 擴(kuò)增結(jié)果采用灰度分析。結(jié)果O N o t c h l 蛋白在正常食管粘膜上皮組織

5、和原位癌中的陽(yáng)性率分別為8 2 ．9 ％、6 8 ．7 ％，二者無(wú)顯著性差異( 乃0 ．0 5 ) 。但均顯著高于食管鱗癌組織3 7 ．1 ％( 尸 O ．0 5 ) ，但與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的有關(guān)( P < O ．0 5 ) 。③對(duì)同一患者W e s t e r n —b l o t 檢測(cè)結(jié)果顯示在腫瘤組織中N o t c h l 蛋白的表達(dá)明顯低于癌周正常組織。④對(duì)同一患者，R T —P C R 檢測(cè)結(jié)果顯示N o t c h l m