1、PLK1(Polo—like kinase 1)是調控中心體成熟、染色體分離和有絲分裂退出的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶。PLK1對于維持有絲分裂過程中基因組穩(wěn)定性非常重要，在多種惡性腫瘤中發(fā)揮作用。本實驗室在前期工作中發(fā)現(xiàn)PLK1基因所在的16p12染色體區(qū)帶在食管鱗癌中存在增益，本研究旨在探討PLK1在食管鱗癌中的表達變化及其參與該病發(fā)生發(fā)展的分子機制。 首先采用免疫組化方法檢測了PLK1在155例食管鱗癌中的表達及與腫瘤臨床病理

2、參數(shù)之間的關系，繼而通過RNAi降低PLK1的表達，觀察其對食管鱗癌細胞增殖、凋亡的影響，采用免疫共沉淀和激光共聚焦方法確定PLK1的相互作用蛋白。 結果表明，與相應的正常上皮相比，PLK1在71.6％的人食管鱗癌組織中表達明顯升高。PLK1過表達與區(qū)域淋巴結轉移(P=0.001)和腫瘤分期(P=0.033)密切相關。PLK1表達陽性患者的術后生存時間顯著短于PLK1表達陰性的患者(P=0.001)。而且，多因素生存分析顯示PL

3、K1是一個獨立的預后因素(RR=4.921，P=0.011)。通過熒光原位雜交(FISH)檢測食管鱗癌中PLK1基因的擴增情況，發(fā)現(xiàn)37.5％的標本中包含PLK1基因的RP11—141E3位點發(fā)生了拷貝數(shù)的增加，說明基因擴增是PLK1在部分食管鱗癌組織中過表達的原因之一。 通過RNA干擾降低PLK1的表達，能顯著抑制食管鱗癌細胞增殖，并誘導細胞發(fā)生凋亡。PI染色和流式細胞儀檢測表明，與對照組相比PLK1—RNAi組出現(xiàn)明顯的凋亡

4、峰，并呈時間依賴性增強。抑制PLK1表達導致線粒體膜電位降低、caspase—9和caspase—3活化、以及下游多聚ADP核糖聚合酶(PARP)降解，同時表現(xiàn)線粒體凋亡通路相關蛋白Mcl—1和Bcl—2蛋白水平下降。免疫共沉淀和激光共聚焦分析結果顯示PLK1在細胞內(nèi)分別與survivin和α—catenin形成復合物。PLK1敲降導致survivin蛋白表達降低。 以上結果表明PLK1可能在細胞凋亡、分化、粘附和遷移中發(fā)揮作用