1、目的：通過將己構(gòu)建成功的針對CDK2基因的siRNA真核表達載體,轉(zhuǎn)染至人肝癌細胞株SMMC7721中,研究其對細胞周期調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中相關(guān)基因CyclinE表達的影響,以及中藥樹舌多糖GF對其的協(xié)同作用。 方法：將構(gòu)建針成功的針對CDK2基因的siRNA真核表達載體通過陽離子脂質(zhì)體試劑法轉(zhuǎn)染肝癌細胞株SMMC7721,利用實時熒光定量PCR技術(shù)研究RNAi抑制CDK2基因后對細胞周期調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中相關(guān)基因CyclinE的mRNA水平的影

2、響；MTT法檢測樹舌多糖GF體外對SMMC7721細胞增殖抑制情況并篩選出體外抗瘤的有效樹舌多糖GF劑量；并采用熒光定量PCR技術(shù)研究樹舌多糖對肝癌SMMC7721細胞中CyclinE基因表達的影響并探討該多糖對其的協(xié)同作用。 結(jié)果： 1.樹舌多糖GF2.5μg·mL-1、5μg·mL-1、10μg·mL-1對肝癌細胞增殖有明顯抑制作用,抑制率分別為20.01％、20.47％、24.44％。 2.樹舌多糖GF2.

3、5μg·mL-1、10μg·mL-1可使CyclinE基因mRNA表達水平下調(diào)。與SMMC7721相比,樹舌多糖GF2.5μg·mL-1組與樹舌多糖GF10μg·mL-1組CyclinE基因mRNA水平分別下調(diào)74％、68％。 3.RNAi抑制CDK2基因表達后對CyclinE基因mRNA表達有影響,siRNA190組中CyclinE基因下調(diào)20％；siRNA191組中CyclinE基因的mRNA表達下調(diào)36％。 4.與

4、單純siRNA190組相比,樹舌多糖GF10gg·mL-1+siRNA190組可使CyclinE基因的mRNA水平比單純siRNA190片段組下調(diào)提高5％；與單純siRNA191組相比,樹舌多糖GF2.5μg·mL-1、10μg·mL-1與siRNA191組合用均未能使肝癌細胞中CyclinE基因mRNA水平下調(diào)。 結(jié)論： 1.肝癌SMMC7721細胞的過度增殖與CyclinE基因過度表達關(guān)系密切。 2.樹舌多糖

5、GF對體外肝癌細胞株SMMC7721的增殖有明顯抑制作用,其機制可能是通過下調(diào)CyclinE基因表達實現(xiàn)的。 3.肝癌細胞中CyclinE基因的mRNA表達對CDK2的表達有明顯的關(guān)聯(lián)性,RNAi特異地沉寂肝癌細胞中CDK2基因后,CyclinE基因表達下調(diào)。 4.樹舌多糖GF對RNAi技術(shù)特異沉寂肝癌細胞CDK2基因表達后下調(diào)CyclinE基因表達有一定的協(xié)同作用,表明樹舌多糖GF可能成為肝癌基因治療中的一個新型輔助藥