鉤端螺旋體抗原表位預測及其重組、表達的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、鉤端螺旋體(Leptospira)是鉤端螺旋體病(Leptospirosis)的病原微生物.它的致病機制被認為與其外膜蛋白(OMPs)有關(guān).研究表明,外膜蛋白LipL32和OmpL1是其優(yōu)勢抗原.本研究通過計算機預測程序ProPred和ANTIGENIC預測到LipL32和OmpL1的各2個既具有MHC結(jié)合肽特性又有B細胞表位(Bcell epitope)特征的肽段,作為生物學實驗的候選肽段.應用PCR技術(shù)合成包含以上候選肽段的3種重組

2、表位基因片段.克隆PCR產(chǎn)物,構(gòu)建重組質(zhì)粒,測序結(jié)果顯示,重組表位基因序列中沒有出現(xiàn)移碼和堿基置換.進一步將重組表位基因克隆到pGEX-5X載體,獲得表達質(zhì)粒,在BL21中誘導表達融合蛋白.3種融合蛋白均獲得高效表達.經(jīng)優(yōu)化誘導條件,用GSTrapFF 1ml純化柱純化獲得2種高純度的融合蛋白.用MAT法檢測經(jīng)純化的融合蛋白免疫的BALB/c小鼠的抗血清,結(jié)果顯示,2種融合蛋白產(chǎn)生的抗體滴度分別為1/25和1/75.79.本研究預測了2

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