1、[目的] 模擬人工髖關(guān)節(jié)置換術(shù)，建立一種股骨干髓內(nèi)循環(huán)異常導(dǎo)致骨內(nèi)高壓形成的動(dòng)物模型。通過(guò)特制的骨內(nèi)壓檢測(cè)儀器檢測(cè)未鉆孔減壓和鉆孔減壓后骨內(nèi)高壓的變化和轉(zhuǎn)歸及其對(duì)遠(yuǎn)端關(guān)節(jié)軟骨在不同觀察時(shí)間段的影響。以期能給骨水泥固定型人工關(guān)節(jié)在臨床的使用提供一個(gè)預(yù)防術(shù)后骨內(nèi)高壓的方法的理論依據(jù)，并為臨床尋找有效處理術(shù)后骨內(nèi)高壓的方法提供實(shí)驗(yàn)資料。 [方法] 1.設(shè)計(jì)制作適合用于模型動(dòng)物骨內(nèi)壓測(cè)量的儀器設(shè)備。 2.動(dòng)物模型

2、建立：采取兔單側(cè)(右側(cè))股骨髓腔內(nèi)灌注PMMA骨水泥而另一側(cè)(左側(cè))不灌注作為空白對(duì)照的方法，制作骨水泥阻塞股骨近中段骨干髓腔的兔動(dòng)物模型。根據(jù)不同處理方法隨機(jī)分成正常對(duì)照(A組)、鉆孔減壓(B組)、未鉆孔減壓(C組)、空白對(duì)照(D組)4組；再根據(jù)不同觀察時(shí)間段和實(shí)驗(yàn)要求，進(jìn)一步分成造模后當(dāng)天(T0)、4周(T4)、8周(T8)、16周(T16)和32周(T32)5個(gè)亞組。 3.骨髓腔內(nèi)血循環(huán)異常后骨內(nèi)壓變化的情況：術(shù)后使用重酒

3、石酸去甲腎上腺素作家兔耳緣靜脈注射，以了解造模對(duì)髓腔內(nèi)循環(huán)的影響及骨內(nèi)壓的變化情況。 4.骨內(nèi)壓的測(cè)量：使用HU-50型數(shù)顯式微壓力測(cè)量?jī)x檢測(cè)不同觀察時(shí)間段觀測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的骨內(nèi)壓改變情況。 5.病理形態(tài)學(xué)觀察：對(duì)正常和模型動(dòng)物實(shí)驗(yàn)側(cè)股骨遠(yuǎn)端軟骨，采用HE染色及透射電鏡方法進(jìn)行組織結(jié)構(gòu)觀察。 6.免疫組織化學(xué)檢測(cè)及分子生物學(xué)(RT-PCR)檢測(cè)：利用免疫組織化學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)軟骨細(xì)胞內(nèi)的基質(zhì)金屬蛋白酶1，3(MM

4、P-1，3)的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。 [結(jié)果] 1.設(shè)計(jì)制作的HU-50型數(shù)顯式微壓力測(cè)量?jī)x精確度高，操作簡(jiǎn)單。 2.股骨遠(yuǎn)端標(biāo)本大體觀察：鉆孔減壓組各時(shí)間點(diǎn)所取標(biāo)本與正常對(duì)照組無(wú)明顯區(qū)別；未鉆孔減壓組：4周時(shí)所取標(biāo)本外觀與正常組無(wú)明顯差異；而8周時(shí)可見遠(yuǎn)端關(guān)節(jié)軟骨光澤度下降，顏色灰暗；16周時(shí)，軟骨面有細(xì)小糜爛，軟骨層變薄，隱約可見軟骨下骨；32周時(shí)，明顯可見軟骨面凸凹不平，關(guān)節(jié)軟骨周圍增生出現(xiàn)。 3.X線攝片

5、：顯示術(shù)后骨水泥在股骨中段以上完全阻塞髓腔，充填滿意。 4.骨內(nèi)循環(huán)異常時(shí)骨內(nèi)壓的變化：通過(guò)家兔耳緣靜脈注射重酒石酸去甲腎上腺素并測(cè)量實(shí)驗(yàn)組與正常組的家兔股骨內(nèi)壓，兩者之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，證實(shí)經(jīng)造模后，股骨髓腔內(nèi)循環(huán)出現(xiàn)明顯異常并引起骨內(nèi)壓的改變。 5.骨內(nèi)壓的測(cè)量：(1)正常對(duì)照組與空白對(duì)照組股骨遠(yuǎn)端骨內(nèi)壓無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別；(2)造模當(dāng)天實(shí)驗(yàn)側(cè)骨內(nèi)壓明顯增高，同組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物骨內(nèi)壓雙側(cè)對(duì)比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.0

6、5)；造模后4、8、16、32周未鉆孔減壓組處于骨內(nèi)高壓狀態(tài)，雖隨觀察時(shí)間延長(zhǎng)，骨內(nèi)壓有下降趨勢(shì)，但仍然顯著高于正常對(duì)照(P＜0.05)；(3)鉆孔減壓組骨內(nèi)壓在鉆孔處理后即刻下降，經(jīng)4、8、16、32周觀察，未見明顯升高，與正常對(duì)照組相比無(wú)明顯差異。 6.HE染色：染色后光鏡觀察發(fā)現(xiàn)：正常關(guān)節(jié)軟骨與鉆孔減壓組各時(shí)間點(diǎn)所做標(biāo)本切片無(wú)明顯形態(tài)學(xué)改變；未鉆孔減壓組關(guān)節(jié)軟骨4周時(shí)未見明顯改變；8周時(shí)表淺層軟骨細(xì)胞數(shù)量明顯減少，中間層軟

7、骨細(xì)胞排列出現(xiàn)紊亂；16周時(shí)表淺軟骨細(xì)胞稀疏，關(guān)節(jié)面糜爛出現(xiàn)，中、深層軟骨細(xì)胞排列明顯紊亂；32周時(shí)軟骨層明顯變薄，表淺層軟骨細(xì)胞消失，關(guān)節(jié)表面凹凸不平，失去正常關(guān)節(jié)面結(jié)構(gòu)。 7.天狼猩紅染色：染色后圖像分析發(fā)現(xiàn)：正常對(duì)照組、空白對(duì)照組與鉆孔減壓組關(guān)節(jié)軟骨各時(shí)間點(diǎn)所做標(biāo)本切片中膠原含量(光密度值)無(wú)明顯差異；未鉆孔減壓組關(guān)節(jié)軟骨4周時(shí)膠原含量開始減少，光密度值下降，隨觀察時(shí)間延長(zhǎng)，8、16、32周后，其光密度值呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，與正

8、常對(duì)照組比較，顯著性差異存在(P＜0.05)。 8.透射電鏡觀察：正常對(duì)照組、空白對(duì)照組與鉆孔減壓組各時(shí)間點(diǎn)觀察未見明顯形態(tài)學(xué)異常；未鉆孔減壓組呈現(xiàn)軟骨細(xì)胞和膠原組織的損害隨時(shí)間遷延而加重，16、32周均可見軟骨細(xì)胞的壞死和崩解。 9.免疫組化檢測(cè)：正常對(duì)照組、空白對(duì)照組與鉆孔減壓組各時(shí)間點(diǎn)所取標(biāo)本基質(zhì)金屬蛋白酶1，3染色均為陰性；未鉆孔減壓組則隨時(shí)間延長(zhǎng)軟骨各層出現(xiàn)基質(zhì)金屬蛋白酶1，3陽(yáng)性染色。 10.RT-P

9、CR：未鉆孔減壓組4周時(shí)出現(xiàn)較明顯的基質(zhì)金屬蛋白酶1，3條帶，其含量隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加。鉆孔減壓組在術(shù)后4周出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)條帶，但隨著時(shí)間延長(zhǎng)而轉(zhuǎn)為陰性。 [結(jié)論] 1.設(shè)計(jì)制作的HU-50型數(shù)顯式微壓力測(cè)量?jī)x適合于直接測(cè)量模型動(dòng)物骨內(nèi)壓力變化。 2.本實(shí)驗(yàn)方法所建立的骨內(nèi)高壓動(dòng)物模型可靠。 3.髓內(nèi)循環(huán)異常后引起骨內(nèi)高壓形成，在未鉆孔減壓組骨內(nèi)高壓長(zhǎng)時(shí)間存在，隨時(shí)間推移壓力雖有下降趨勢(shì)，但遠(yuǎn)端關(guān)節(jié)軟骨出現(xiàn)形