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文檔簡介
1、人類eag相關基因(Humanether-a-go-gorelatedgene1,HERG1)鉀離子通道蛋白表達于多種組織來源的腫瘤中,由于其與腫瘤細胞的增殖、凋亡、侵襲等一系列生物學活性相關而越來越受到重視。我實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)HERG1基因在不同惡性程度的骨腫瘤組織有表達,且表達水平與腫瘤惡性程度有關。前期的研究同時顯示在骨肉瘤細胞系中HERG1mRNA表達水平增加。本研究試圖闡明HERG1在骨肉瘤細胞中的表達及其與骨肉瘤細胞生物學
2、行為的關系。
目的:本研究旨在探討HERG1在骨肉瘤細胞系SOSP-9607和MG-63中的表達情況,并通過抑制HERG1的表達研究其對骨肉瘤細胞增殖和侵襲能力的影響。
方法:(1)采用免疫細胞化學、免疫熒光和Westernblot的方法研究HERG1在骨肉瘤細胞系SOSP-9607和MG-63中的表達情況;(2)構(gòu)建針對HERG1的shRNA穩(wěn)定表達載體,并轉(zhuǎn)染骨肉瘤細胞系,建立穩(wěn)定抑制HERG1表達的骨肉瘤細胞系
3、;(3)運用CCK-8檢測抑制HERG1表達對骨肉瘤細胞增殖能力的影響;(4)運用Transwell檢測抑制HERG1表達對骨肉瘤細胞侵襲能力的影響。
結(jié)果:(1)免疫細胞化學、免疫熒光和Westernblot結(jié)果顯示HERG1在兩株骨肉瘤細胞中呈陽性表達;(2)成功構(gòu)建針對HERG1的shRNA真核表達載體;(3)成功建立穩(wěn)定表達HERG1-shRNA的細胞系,并篩選出抑制HERG1表達最高的細胞株;(4)CCK-8檢測結(jié)果
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