1、骨肉瘤是一種少見(jiàn)的骨原發(fā)惡性腫瘤，早期肺轉(zhuǎn)移、臨床預(yù)后差是骨肉瘤的特點(diǎn)，也是影響患者生存率的重要因素。microRNA是一種具有轉(zhuǎn)錄后調(diào)控作用的小分子RNA，具有多種生理功能，參與多種惡性腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移的調(diào)控。研究發(fā)現(xiàn)，miR-29家族中的miR-29c在多種惡性腫瘤中表達(dá)下調(diào)，并驗(yàn)證其對(duì)多種惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移和增殖起到抑制作用，前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-29c在骨肉瘤組織和細(xì)胞系中異常表達(dá)，提示其可能參與了骨肉瘤的增殖和轉(zhuǎn)移。
　　目的：

2、
　　驗(yàn)證miR-29c在骨肉瘤組織中的異常表達(dá)和不同侵襲能力骨肉瘤細(xì)胞系中的差異表達(dá)；探究miR-29c對(duì)骨肉瘤細(xì)胞系增殖、侵襲和遷移能力的影響，為骨肉瘤的分子靶向治療提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.采用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)68例骨肉瘤、正常組織標(biāo)本miR-29c的表達(dá)；用此法檢測(cè)SOSP-9607骨肉瘤細(xì)胞系的兩組侵襲性不同的細(xì)胞亞系F5M2和F4中miR-29c的表達(dá)。
　　2.采用Lipofectami

3、ne2000脂質(zhì)體法分別將miR-29c mimics和inhibitor瞬時(shí)轉(zhuǎn)染入SOSP-9607的兩個(gè)細(xì)胞亞系，構(gòu)建miR-29c高表達(dá)、低表達(dá)骨肉瘤細(xì)胞模型。
　　3.對(duì)所構(gòu)建的細(xì)胞模型進(jìn)行腫瘤細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)，包括Transwell侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)、MTT法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖曲線；流式細(xì)胞儀法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞周期和凋亡比例。
　　結(jié)果：
　　1.骨肉瘤組織miR-29c表達(dá)明顯低于瘤旁正常組織；高侵襲性F5M2骨肉瘤細(xì)胞

4、系miR-29c表達(dá)明顯低于低侵襲性F4骨肉瘤細(xì)胞系。
　　2.用Lipofectamine2000脂質(zhì)體分別將miR-29c mimics和inhibitor成功轉(zhuǎn)入F5M2骨肉瘤細(xì)胞系和F4骨肉瘤細(xì)胞系。RT-PCR結(jié)果驗(yàn)證F5M2/29c mimics細(xì)胞中miR-29c表達(dá)增加；F4/29c inhibitor細(xì)胞通過(guò)RT-PCR間接驗(yàn)證其靶基因的表達(dá)，證明F4骨肉瘤細(xì)胞miR-29c下調(diào)成功。
　　3.Transw

5、ell細(xì)胞侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)顯示，miR-29c上調(diào)的骨肉瘤細(xì)胞F5M2侵襲和遷移能力較對(duì)照組均明顯下降；miR-29c下調(diào)的骨肉瘤細(xì)胞F4侵襲和遷移能力較對(duì)照組明顯提升。MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)顯示，miR-29c上調(diào)的骨肉瘤細(xì)胞F5M2增殖能力較對(duì)照組減弱，細(xì)胞增殖曲線下移；miR-29c下調(diào)的骨肉瘤細(xì)胞F4增殖能力較對(duì)照組增強(qiáng)，細(xì)胞增殖曲線上移。
　　4.流式細(xì)胞儀細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)顯示，miR-29c上調(diào)的骨肉瘤細(xì)胞F5M2與對(duì)

6、照組相比，各周期腫瘤細(xì)胞比例無(wú)明顯差異，凋亡細(xì)胞比例也無(wú)明顯差異；miR-29c下調(diào)的骨肉瘤細(xì)胞F4與對(duì)照組相比，各周期腫瘤細(xì)胞比例亦無(wú)明顯差異，凋亡細(xì)胞比例無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　1.miR-29c骨肉瘤組織中表達(dá)含量下調(diào)，且高侵襲性骨肉瘤細(xì)胞miR-29c表達(dá)含量低于低侵襲性骨肉瘤細(xì)胞系，提示miR-29c與腫瘤侵襲能力呈負(fù)相關(guān)，miR-29c可能參與了骨肉瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移能力的調(diào)控。
　　2.通過(guò)構(gòu)建m