1、目的：分離、培養(yǎng)擴(kuò)增BMSCs并高效誘導(dǎo)其成為神經(jīng)干細(xì)胞，初步探討B(tài)MSCs源NSCs移植治療大鼠局灶性腦缺血的可行性。 方法： 1．細(xì)胞培養(yǎng)：采用密度梯度離心法分離出BMSCs，在DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)。第4代BMSCs的培養(yǎng)基中加入BDNF20ng／ml、RA20ng／mI分化處理3天。對(duì)誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化細(xì)胞行Nestin免疫細(xì)胞化學(xué)染色。 2．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組：32只健康SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(8只)、缺血對(duì)照組(8只

2、)、缺血BMSCs移植組(8只)和缺血BMSCs源NSCs移植組(8只)，采用線栓法制作大腦中動(dòng)脈缺血再灌注模型。 3．細(xì)胞移植：用終濃度為10ug／ml的BrdU標(biāo)記第4代培養(yǎng)的BMSCs和NSCs。標(biāo)記3天后調(diào)細(xì)胞濃度為3×10。／ml供移植用。在術(shù)后1 d，將1ml BMSCs經(jīng)尾靜脈注射入缺血BMSCs移植組大鼠體內(nèi)，1mI NSCs注射入缺血BMSCs源NSCs移植組大鼠體內(nèi)，1mI PBS注射入缺血對(duì)照組大鼠體內(nèi)，假

3、手術(shù)組不做任何移植。 4、行為學(xué)檢測(cè)：于術(shù)后1d、7d、14d、21d、28d分別用Chen的NSS量表對(duì)大鼠的神經(jīng)功能評(píng)分。 5、組織學(xué)檢查：各組動(dòng)物隨機(jī)分為為2個(gè)亞組，分別于術(shù)后14d、28d行腦灌注固定取材。相鄰切片分別采用免疫組化SABC法檢測(cè)：Brdu、Nestin陽(yáng)性細(xì)胞，TUNEL法檢測(cè)凋亡細(xì)胞。 結(jié)果：采用密度梯度離心法成功分離出BMSCs，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化細(xì)胞Nestin陽(yáng)性率達(dá) (86.15±4.5

4、8)％，表明這些轉(zhuǎn)化細(xì)胞具有神經(jīng)干細(xì)胞性質(zhì)；BMSCs源NSCs移植組在各時(shí)點(diǎn)的的神經(jīng)功能康復(fù)均優(yōu)于BMSCs組(P<0.05)和對(duì)照組(P<0.01)，且4w時(shí)神經(jīng)功能恢復(fù)明顯優(yōu)于2w時(shí)(P<0.05)；BMSCs移植組和BMSCs源NSCs組在缺血邊緣區(qū)均能檢測(cè)到BrdU汞Nestin陽(yáng)性細(xì)胞，但BMSCs源NSCs移植組的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多于BMSCs組和對(duì)照組(P<0.01)。BMSCs源NSCs移植組術(shù)后28d時(shí)缺血邊緣區(qū)的凋亡細(xì)胞