1、隨著石油價(jià)格的日益增長，燃料酒精有望成為未來代替汽油燃料的能源，但在燃料酒精發(fā)酵過程中的各種不利因素如高溫、高糖、高滲透壓等，限制了燃料乙醇的工業(yè)化生產(chǎn).而熱休克蛋白可識(shí)別變性蛋白表面的疏水區(qū)域，加速它們的重新折疊，防止不可逆的凝聚反應(yīng)發(fā)生有效地保護(hù)細(xì)胞在不利條件下不受傷害。 本研究運(yùn)用基因工程技術(shù)，以Zymomonas mobilis和PyrocOccUS furiosus基因組DNA為模板通過PCR擴(kuò)增，乙醇脫氫酶基因adh

2、B,丙酮酸脫梭酶基因pdc和熱休克蛋白基因hsp，通過PLac啟動(dòng)子構(gòu)建3個(gè)基因可在大腸桿菌中表達(dá)的操縱子，分別構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒pIAP、pLAPH。將質(zhì)粒pLAPH導(dǎo)入宿主菌Lacl中，獲得工程菌Lact-LAPH，經(jīng)過熱適應(yīng)處理后獲得工程菌LacH-LAPH。 分別在高糖、高滲透壓、酸性以及高溫高糖的發(fā)酵條件下，利用氣相色譜檢測(cè)發(fā)酵液中的乙醇含量。 (1)在不同逆境條件下，熱休克蛋白基因有利于基因工程菌乙醇產(chǎn)量的提高。其

3、中在18％葡萄糖發(fā)酵最明顯，含有hsp基因的細(xì)菌乙醇產(chǎn)量為8.38 g/L，是不含有hsp基因的細(xì)菌的6倍。 (2)熱休克處理有利于提高細(xì)菌的生長速率和乙醇產(chǎn)量。經(jīng)過45℃連續(xù)傳代培養(yǎng)30次后的細(xì)胞，不論在細(xì)菌生長速率還是乙醇產(chǎn)量都稍高于僅含有Hsp而未經(jīng)熱適應(yīng)的對(duì)照菌。其中在高糖、高滲透壓、酸性以及高溫高糖的產(chǎn)量分別是對(duì)照菌的l-2倍、2.1倍、3.1倍和2.1倍。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在逆境下通過熱休克蛋白的表達(dá)，有利于產(chǎn)