1、乳牙根吸收是一種區(qū)別于恒牙的重要生理現(xiàn)象，最終導致乳牙的脫落，多核破牙細胞(odontoclast)是引起牙體硬組織吸收的主要功能細胞。破牙細胞與引起骨吸收的破骨細胞(osteoclast)在組織學形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)等方面具有相似性，如胞體大，細胞器豐富，突觸多，TRAP染色陽性等，并具有硬組織吸收功能，但二者在形態(tài)和功能等方面亦存在差異。 牙齒與骨組織具有相似的物理化學特點，吸收過程相似，均包括羥基磷灰石脫礦和有機物降解。研究表明

2、，破骨細胞或破牙細胞分泌多種蛋白水解酶，參與調(diào)節(jié)硬組織的吸收?；|(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)是一種重要的細胞外基質(zhì)蛋白酶，以酶原形式分泌到細胞外，活化后降解有機基質(zhì)。目前共發(fā)現(xiàn)20余種MMPs，分為可溶性MMPs(soluble MMPs)和膜型MMPs(membrane—type MMPs，MT—MMPs)。其中MT—MMPs是細胞膜表面基質(zhì)金屬蛋白酶，共有6種。 膜Ⅰ型基質(zhì)金屬

3、蛋白酶(membrane—typel MMP，MT1-MMP/MMP14)是MT1-MMPs中分布最為廣泛的成員，能夠直接降解多種細胞外基質(zhì)大分子，并參與激活其他蛋白酶原，引起水解的級聯(lián)效應，由于其具有廣泛的功能得到了學者的關(guān)注。近年研究發(fā)現(xiàn)，MT1-MMP作為重要的蛋白水解酶，在多部位腫瘤、炎癥、創(chuàng)傷愈合、血管形成、卵巢發(fā)育等多種病理和生理組織中高表達并發(fā)揮功能。在破骨細胞中，MT1-MMP陽性表達于細胞前沿即胞膜突觸處，推測MT1-

4、MMP可能對破骨細胞向骨吸收表面的遷移、黏附起到重要的作用。由于破牙細胞與破骨細胞具有相似的酶化學特點，推測MT1-MMP可能在體外分離的破牙細胞中有表達。本實驗擬采用酶消化法，分離培養(yǎng)、鑒定成熟的破牙細胞，進行細胞形態(tài)學觀察和吸收功能的檢測，為牙根吸收機制的研究提供細胞模型；采用免疫細胞化學方法檢測體外培養(yǎng)人乳牙破牙細胞中MT1-MMP蛋白的表達，分析MT1-MMP在牙根吸收過程中的作用，為探討牙根吸收的機制提供根據(jù)。 目的：

5、 體外分離、培養(yǎng)成熟的破牙細胞，并從形態(tài)和功能等方面進行細胞鑒定，建立破牙細胞體外分離方法，為牙根吸收機制的研究建立細胞模型；檢測MT1-MMP在體外分離培養(yǎng)破牙細胞中的表達，探討MT1-MMP在乳牙根吸收過程中的作用。 材料和方法： 1.收集中山大學附屬口腔醫(yī)院兒童口腔科5～7歲因滯留或咬合誘導而需要拔除的無齲及未經(jīng)治療的乳前牙，采用Ⅰ型膠原酶和分散酶聯(lián)合消化的方法分離破牙細胞，觀察細胞形態(tài)并進行細胞鑒定。

6、 2.應用免疫細胞化學方法檢測體外培養(yǎng)的破牙細胞中MT1-MMP蛋白的表達。 結(jié)果： 體外分離得到的細胞具有典型的多核巨細胞特點，細胞大小不一，形態(tài)不規(guī)則，呈油煎蛋形、梭形、扇形、圓形等，細胞多突觸，胞核數(shù)目不等(幾個到十幾個)，細胞TRAP染色陽性。細胞與骨磨片共培養(yǎng)3天后，在倒置顯微鏡下觀察可見吸收陷窩的形成，證實分離培養(yǎng)的細胞具有硬組織吸收功能。免疫組織化學顯示，體外分離的破牙細胞MT1-MMP表達陽性，分布于