1、目的：研究神經(jīng)干細(xì)胞(neuralstemcells,NSCs)移植及NSCs與神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)聯(lián)合移植對(duì)阿爾茨海默病(AD)大鼠學(xué)習(xí)記憶的恢復(fù)及腦內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞的存活、遷移和分化的影響。 方法：①取新生大鼠海馬中神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞巢蛋白(Nestin)的表達(dá)。胎牛血清誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞分化，行NSE(神經(jīng)元特異烯醇化酶)、GFAP(膠質(zhì)纖維酸性蛋白)免疫細(xì)胞化學(xué)染色，鑒定神經(jīng)元及星形膠質(zhì)細(xì)

2、胞。 ②單側(cè)切斷大鼠穹隆海馬傘(FF)制備AD模型。 ③利用腦立體定位技術(shù)分別將神經(jīng)干細(xì)胞及神經(jīng)干細(xì)胞與NGF聯(lián)合移植于AD大鼠側(cè)腦室內(nèi)，移植后兩周和三周作Y-迷宮實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)大鼠的學(xué)習(xí)能力和記憶能力。移植后四周取腦應(yīng)用免疫組化及免疫熒光技術(shù)檢測(cè)移植后神經(jīng)干細(xì)胞的存活、遷移和分化。 結(jié)果：從新生大鼠海馬分離的細(xì)胞中成功培養(yǎng)出神經(jīng)干細(xì)胞，且細(xì)胞絕大多數(shù)表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞的標(biāo)志物神經(jīng)巢蛋白(Nestin)。胎牛血清的誘導(dǎo)下

3、，我們所分離培養(yǎng)的神經(jīng)球具有多分化潛能，少部分細(xì)胞分化為NSE陽(yáng)性的神經(jīng)元細(xì)胞，大部分細(xì)胞分化為GFAP陽(yáng)性的星形膠質(zhì)細(xì)胞。 將5-溴脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)標(biāo)記的神經(jīng)干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞與NGF聯(lián)合移植于AD大鼠的側(cè)腦室內(nèi)，Y-迷宮測(cè)試大鼠的學(xué)習(xí)、記憶能力：AD組明顯下降(P＜0.01)；神經(jīng)干細(xì)胞組(NSCs組)與AD組比較有改善(P＜0.05)神經(jīng)干細(xì)胞與NGF聯(lián)合移植組(NGF組)大鼠的學(xué)習(xí)、記憶能力進(jìn)一步改善，與NSC

4、s組比較有差異(P＜0.05)，而與正常組比較差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)顯示：NSCs組及NGF組大鼠側(cè)腦室附近區(qū)域可見(jiàn)BrdU陽(yáng)性細(xì)胞，并向周圍遷移NSE免疫組化染色結(jié)果顯示，NGF組大鼠腦內(nèi)皮層及海馬區(qū)NSE陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較NSCs組回升顯著(P＜0.01)；用免疫熒光雙標(biāo)方法檢測(cè)，可發(fā)現(xiàn)腦內(nèi)皮層及海馬區(qū)部分BrdU陽(yáng)性細(xì)胞分化為NSE陽(yáng)性細(xì)胞，NSCs組及NGF組雙陽(yáng)性細(xì)胞總數(shù)占細(xì)胞總數(shù)的百分比分別為(18.4