1、背景
　　 應(yīng)用神經(jīng)干細胞/前體細胞治療外廚及中樞神經(jīng)損傷目前在國內(nèi)外有不少報道。由于神經(jīng)組織尤其是中樞神經(jīng)損傷后自身修復(fù)能力很差，經(jīng)傳統(tǒng)治療患者的神經(jīng)功能往往得不到滿意的恢復(fù)。神經(jīng)干細胞具有自我更新和分化潛能，故近年來通過移植神經(jīng)干細胞治療神經(jīng)損傷成為研究的熱點。馬尾神經(jīng)損傷導(dǎo)致馬尾神經(jīng)綜合征(cauda equina syndrome，CES)是臨床常見疾病，目前手術(shù)及神經(jīng)營養(yǎng)藥物治療效果有限，患者往往殘留膀胱功能障礙、性功

2、能障礙、鞍區(qū)皮膚感覺障礙，嚴重影響該類患者的生活質(zhì)量。但關(guān)于移植神經(jīng)干細胞治療馬尾神經(jīng)損傷的研究目前還未見報道。
　　 本研究應(yīng)用取自背根神經(jīng)節(jié)的神經(jīng)干細胞移植治療馬尾神經(jīng)損傷的研究目前還未見報道。本實驗首先建立一個大鼠馬尾神經(jīng)壓迫損傷模型，設(shè)計將新生大鼠背根神經(jīng)節(jié)干細胞(DRG-NSCs)移植到相應(yīng)的受損馬尾神經(jīng)周圍腦脊液中，以期通過移植DRG-NSCs的增殖、遷移和分化，從而達到修復(fù)馬尾神經(jīng)功能的目的。同時觀察DRG-NSC

3、s在體外的分化情況。
　　 研究目的
　　 建立穩(wěn)定的大鼠馬尾神經(jīng)壓迫損傷模型。明確蛛網(wǎng)膜下腔顯微注射(鞘內(nèi)移植)方法移植干細胞的可行性。觀察新生大鼠DRG-NSCs在受損馬尾神經(jīng)周圍腦脊液中和體外的增殖、分化情況。
　　 研究方法
　　 1、從新生2天的SD大鼠中切除背根神經(jīng)節(jié)，分離培養(yǎng)神經(jīng)干細胞(DRG-NSCs)，經(jīng)神經(jīng)球鑒定、培養(yǎng)3代后，用MACS(免疫磁珠篩選系統(tǒng))篩選Nestin+DRG-NS

4、Cs，往Nestin+DRG-NSCs中轉(zhuǎn)入Lentivirus-(e)GFP載體。
　　 2、運用免疫熒光染色方法檢測DRG-NSCs的體外分化能力。
　　 3、選取36只出生6周左右的實驗SD大鼠，將大鼠隨機分為3組：神經(jīng)干細胞組，n=12；對照組，n=12；假手術(shù)組，n=12。設(shè)計在前兩組每只大鼠的腰4節(jié)段咬除椎板，暴露硬膜囊。將長10mm、厚1.0mm、寬1.0mm的硅膠條置入大鼠L5和L6椎管內(nèi)，建立大鼠馬尾神

5、經(jīng)壓迫損傷模型。模型建立7天后，運用甩尾實驗判定各實驗組大鼠尾部的痛溫覺功能變化，確定模型建立成功。假手術(shù)組只咬除腰4椎板，不予硅膠條壓迫和鞘內(nèi)注射。
　　 4、模型建立7天后，取出硅膠條，分別鞘內(nèi)移植GFP-NSCs(大約800,000GFP-NSCs/只)和注射等量的磷酸鹽緩沖液(PBS)。術(shù)后在設(shè)置的時間點內(nèi)取大鼠馬尾神經(jīng)組織進行免疫組化熒光染色，觀察神經(jīng)干細胞的增殖和分化情況。并定期運用甩尾實驗判定各實驗組大鼠尾部的痛溫

6、覺功能的恢復(fù)情況。
　　 結(jié)果
　　 1、DRG-NSCs在體外經(jīng)不含有神經(jīng)生長因子的分化培養(yǎng)基培養(yǎng)7天后，絕大部分分化為少突膠質(zhì)細胞。
　　 2、成功建立大鼠馬尾神經(jīng)壓迫損傷模型。
　　 3、鞘內(nèi)移植后發(fā)現(xiàn)GFP-NSCs僅在受損馬尾神經(jīng)周圍腦脊液中存活一周時間。經(jīng)免疫組化熒光染色發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)干細胞全部分化為少突膠質(zhì)細胞(04+)，沒有發(fā)現(xiàn)星型膠質(zhì)細胞(GFAP+)和神經(jīng)元(βⅢ-tubulin+)。

7、r>　　 4、鞘內(nèi)移植GFP-NSCs一周后，運用甩尾實驗檢測發(fā)現(xiàn)大鼠尾部的痛溫覺功能沒有明顯恢復(fù)。
　　 結(jié)論
　　 新生大鼠的DRG-NSCs在體外經(jīng)不含有神經(jīng)生長因子的分化培養(yǎng)基培養(yǎng)后絕大部分分化為少突膠質(zhì)細胞。鞘內(nèi)移植的NSCs在受損馬尾神經(jīng)周圍腦脊液中僅存活一周時間。經(jīng)免疫組化熒光染色發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)干細胞全部分化為少突膠質(zhì)細胞(O4+)，沒有發(fā)現(xiàn)星型膠質(zhì)細胞(GFAP+)和神經(jīng)元(βⅢ-tubulin+)。甩尾實