1、松花粉是一種營養(yǎng)十分豐富的天然資源，近年來對其中的脂肪酸和多糖類物質(zhì)進行了大量研究，但對超過10％含量的蛋白研究甚少。蛋白質(zhì)是生命中的基本物質(zhì)，而多肽是蛋白質(zhì)的分解產(chǎn)物。活性多肽具有降低血壓、延緩衰老、抗氧化、保肝、美體養(yǎng)顏、抗疲勞、改善睡眠、增強記憶、抑制腫瘤、增強免疫、促進人體對蛋白質(zhì)及各種有益微量元素的吸收等多種功效，其開發(fā)應(yīng)用是當(dāng)前生物工程領(lǐng)域的熱門課題，所以松花粉中活性多肽的提取是一項非常值得研究的課題。本實驗的旨在從馬尾松花

2、粉中分離純化出一種活性多肽，對其生物活性進行研究，為全面利用馬尾松花粉奠定基礎(chǔ)。 本實驗以馬尾松花粉為研究材料，通過浸提時間、浸提料液比、浸提pH和鹽濃度等單因素條件進行優(yōu)化，以鹽析、透析、離子交換層析、凝膠過濾層析和高效液相色譜等方法從馬尾松花粉中提取出生物活性多肽，并對其進行蛋白含量測定、紫外線全波長掃描、體外抑制肝癌細(xì)胞HpG2和刺激脾臟細(xì)胞增殖等方面進行了分析。主要獲得了以下結(jié)果： 1、馬尾松花粉中的蛋白質(zhì)以堿溶

3、谷蛋白為主，占花粉浸出總蛋白的60％以上，這和其他的蜂花粉有明顯不同，是組成花粉浸出蛋白的主要成分。 2、通過單因素實驗分析確定了馬尾松花粉蛋白的最佳提取條件為：料液比為1：20，浸提時間4h，浸提次數(shù)3次，pH值為8，浸提溫度保持4℃，且不需要添加其它鹽離子。 3、硫酸銨分級沉淀的過程中，通過各個飽和度的摸索，確定了0-60％、60-80％和80-100％三個沉淀組分，其中0-60％組分占總沉淀蛋白量的50％以上，這個

4、組分作為實驗的主要組分。 4、兩次SephadexG25色譜之后，得到一個較純的峰，命名為主峰G2，對G2進行HPLC半制備得到3個峰，分別命名為G2H1、G2H2和G2H3。三個組分中的G2H2具有220nm和280nm兩個最大吸收峰，G2H3的純度達(dá)到90％以上。 5、透析外液經(jīng)過SephadexG25色譜層析之后，得到一個分子量較大的峰，命名為G10，此蛋白SDS-PAGE上顯示單一條帶，表觀分子量16KD。

5、 6、純化的組分G10、G2H1、G2H2和G2H3在200μg/mL時均可以刺激脾臟淋巴細(xì)胞的增殖，促增長率分別是46.10％、29.81％、39.73％、和14.84％，其中G2H1有極顯著刺激作用(P<0.01)，G10有顯著刺激作用(P<0.05)。在100μg/mL時，這四種組分仍然具有促增殖的作用，促進率分別是24.89％、44.58％、29.38％和6.99％，其中G2H1和G10具有顯著性(P<0.05)。主峰G2無論