泰山松花粉多糖的提取及其免疫增強(qiáng)功能的研究.pdf_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、松花粉,又名松花、松黃,始載于唐《新修本草》,其性味甘平無毒。松花粉是最早被人類食用的非蜂源純凈花粉,屬于高效功能型食品,它集聚了大量的生命元素,飽含豐富的營養(yǎng)成分和活性物質(zhì),是天然微型營養(yǎng)庫,堪稱“花粉之王”,它可以全面調(diào)理人體各個(gè)系統(tǒng),對(duì)人類健康大有裨益。目前已經(jīng)證實(shí)多種中藥多糖具有增強(qiáng)免疫的功效,但針對(duì)松花粉多糖的研究國內(nèi)幾乎沒有報(bào)道,因此筆者所在課題組選擇泰山松花粉多糖對(duì)畜禽的免疫增強(qiáng)作用為本研究的切入點(diǎn)。松花粉多糖是保持松花粉

2、特效的營養(yǎng)成份之一,具有非常高的生物活性,松花粉破壁后多糖提取量顯著提高。本課題組于春季采集泰山地區(qū)新鮮松花粉,過篩破壁后用水提醇沉法提取粗多糖,提取過程中用胃蛋白酶和Sevage試劑兩種方法除蛋白,保證了粗多糖較高的純度。
   ㈠泰山松花粉多糖對(duì)小鼠免疫增強(qiáng)作用的影響。目的是為了研究泰山松花粉多糖對(duì)健康小鼠免疫功能的增強(qiáng)作用以及對(duì)免疫抑制小鼠的免疫恢復(fù)作用。用改進(jìn)的水提醇沉法提取泰山松花粉粗多糖。取清潔級(jí)昆明小鼠(雌性)16

3、0只,隨機(jī)分為8組,3個(gè)多糖組(I,II,III),3個(gè)環(huán)磷酰胺(Cytoxan,CTX)-多糖組(IV,V,VI),另外2組為CTX對(duì)照組(VII)和正常對(duì)照組(VIII)。I、IV組多糖注射劑量為400 mg/kg,II、V組多糖注射劑量為200 mg/kg,III、VI組多糖注射劑量為100 mg/kg,從第1天連續(xù)皮下注射7天;IV、V、VI、VII組于第1天每只每次腹腔注射75 mg/kg CTX,隔1天注射一次,共計(jì)3次;V

4、III組皮下注射生理鹽水。第8天,所有小鼠腹腔注射1頭羽份的ND凍干苗,分別在免疫后3、10和15 d采取血液、脾臟和小腸,用β微量法檢測(cè)血清抗體、全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀測(cè)定外周血淋巴細(xì)胞比率、PI染色法檢測(cè)脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率,ELISA法檢測(cè)小腸IgA含量。結(jié)果顯示I、II、III組各指標(biāo)均顯著高于VIII組(P<0.05),其中I、II組與VIII組相比差異極顯著(P<0.01)。IV、V組極顯著高于VII組(P<0.01),VI組顯著高

5、于VII組(P<0.05),IV組結(jié)果與VIII組差異不顯著。并且免疫后10 d的各組顯著高于免疫后3 d的各對(duì)應(yīng)組(P<0.05),與免疫后15 d的差異不顯著。結(jié)果表明泰山松花粉多糖能提高正常小鼠和免疫抑制小鼠的抗體水平、血液淋巴細(xì)胞比率、脾臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率以及小腸IgA含量,200 mg/kg劑量組多糖的效果即非常顯著,400 mg/kg劑量組多糖能使CTX誘導(dǎo)的免疫抑制完全恢復(fù)到正常水平。
   ㈡泰山松花粉多糖對(duì)兔出血

6、癥組織滅活疫苗免疫效果及兔生產(chǎn)性能的影響。目的是為了研究泰山松花粉多糖免疫增強(qiáng)劑對(duì)兔出血癥(rabbitvird hemorrhagic disease,RHD)組織滅活苗的免疫增強(qiáng)作用及對(duì)兔生產(chǎn)性能的影響。用兔出血癥病料制備兔出血癥組織滅活疫苗,然后加入不同劑量用水提醇沉法提取的泰山松花粉多糖(TPPPS)和黃芪多糖(APS)制備兔出血癥多糖滅活苗。選取體重1kg左右的健康獺兔72只(兔出血癥母源抗體效價(jià)為0),隨機(jī)分為6組,3個(gè)松花

7、粉多糖疫苗組(I,II,III),1個(gè)黃芪多糖疫苗對(duì)照組(IV),另外2組為無多糖疫苗對(duì)照組(V)和空白對(duì)照組(VI)。每只家兔注射疫苗液1ml,其中I、II、III組疫苗液中松花粉多糖含量分別為400 mg/ml、200 mg/ml、100 mg/ml,IV組疫苗液中黃芪多糖含量為400 mg/ml,V組疫苗液中不含多糖,VI組為注射等量生理鹽水。分別在免疫后0、3、7、14、21、28、35、42 d采血,用β-微量法HA與HI檢測(cè)

8、血清抗體效價(jià)、全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀測(cè)定外周血淋巴細(xì)胞比率、PI染色法檢測(cè)血液淋巴細(xì)胞增殖率;同時(shí)測(cè)量免疫兔每周的平均日采食量(ADI)和平均日增重(ADG)來評(píng)定松花粉多糖佐劑對(duì)其生產(chǎn)性能的影響。結(jié)果顯示,I、II、III、IV組各指標(biāo)均高于V組,其中I、II、IV組顯著高于V組(P<0.05);I組極顯著高于V組(P<0.01);I組顯著高于II、III組(P<0.05),II組與III組總體差異不顯著。IV組總體水平略低I組。多糖組各

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