1、目的:建立細(xì)菌表達(dá)譜分析技術(shù)平臺(tái);初步將此技術(shù)應(yīng)用于鼠疫耶爾森氏菌基因表達(dá)譜的研究,為鼠疫耶爾森氏菌功能基因組研究奠定基礎(chǔ):(1)磁捕獲雜交法提取和純化細(xì)菌mRNA方法的建立;(2)基于DNA芯片的基因表達(dá)譜分析技術(shù)平臺(tái)的建立與評價(jià);(3)溫度調(diào)節(jié)鼠疫耶爾森氏菌基因表達(dá)譜分析的研究;(4)實(shí)時(shí)定量RT-PCR對表達(dá)譜技術(shù)的評價(jià).方法:利用磁珠捕獲雜交法從總RNA中除去rRNA,再用乙醇沉淀純化得到mRNA;從對各實(shí)驗(yàn)條件的探索行細(xì)菌DN

2、A芯片表達(dá)譜技術(shù)平臺(tái)的搭建與優(yōu)化,用實(shí)時(shí)定量RT-PCR對此技術(shù)平臺(tái)進(jìn)行評價(jià);通過改變培養(yǎng)溫度模擬鼠疫耶爾森氏菌感染哺乳動(dòng)物宿主時(shí)微環(huán)境的變化,研究其可能的致病相關(guān)基因.選取15條基因用實(shí)時(shí)定量RT-PCR對表達(dá)譜分析結(jié)果進(jìn)行評價(jià).結(jié)果:(1)建立了磁珠捕獲雜交法提取和純化細(xì)菌mRNA的方法;(2)搭建了基于DNA芯片的細(xì)菌表達(dá)譜技術(shù)平臺(tái);(3)發(fā)現(xiàn)401個(gè)不同溫度條件下差異表達(dá)的基因,鼠疫耶爾森氏菌的許多重要基因的表達(dá)發(fā)生了變化,如編