1、目的：利用特異的肽核酸(PNA)探針、鏈霉親和素包被的磁性納米顆粒(磁珠)和Cy5納米顆粒，結(jié)合熒光掃描技術(shù)，建立一種特異、快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)鼠疫菌的方法。 方法：針對(duì)鼠疫菌pMTl質(zhì)粒上的cafl基因設(shè)計(jì)并合成一對(duì)特異PNA探針，經(jīng)生物素標(biāo)記后，分別與鏈霉親和素包被的磁珠或Cy5納米顆粒結(jié)合；探針與待測(cè)鼠疫菌的DNA雜交后，磁性納米顆粒牢固連接靶核酸．探針結(jié)合體，用磁分離架收集后即可得純化的特異核酸分子，經(jīng)變性處理后對(duì)Cy5熒光

2、納米顆粒進(jìn)行熒光掃描檢測(cè)。本研究探討了多個(gè)實(shí)驗(yàn)因素對(duì)測(cè)定的影響，并進(jìn)行了特異性和靈敏度檢測(cè)。此外，本研究將PNA探針與DNA探針、磁性納米顆粒與市售磁珠、Cy5熒光納米顆粒標(biāo)記的探針與單個(gè)Cy5分子標(biāo)記的探針進(jìn)行比較，從而驗(yàn)證PNA探針、磁性納米顆粒及Cy5熒光納米顆粒在核酸檢測(cè)技術(shù)中的優(yōu)勢(shì)。 結(jié)果：利用Expedite8909核酸合成系統(tǒng)合成了PNA探針，建立并優(yōu)化了利用PNA探針檢測(cè)鼠疫菌的方法，得到較好的線性關(guān)系；檢測(cè)的靈

3、敏度為0．9[tg／mL(待測(cè)DNA)。通過多項(xiàng)比較，驗(yàn)證了PNA探針、磁性納米顆粒及Cy5熒光納米顆粒在核酸檢測(cè)技術(shù)中的優(yōu)勢(shì)。 結(jié)論：PNA探針的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)決定了其具有卓越的雜交親和性能和特異識(shí)別能力，從而使本研究顯示出較高的特異性和靈敏度，具有較好的應(yīng)用前景：磁性納米顆粒的應(yīng)用可簡(jiǎn)便且有效地將雜交復(fù)合體與未雜交核酸或過量的檢測(cè)探針分離，大大降低非特異核酸分子的干擾，提高了檢測(cè)靈敏度；Cy5熒光納米顆粒具有的光穩(wěn)定性和信號(hào)放大作