1、分類號——U13C——塌州大季YANGZHOUUNIVERSlTY博士學位論文學號旦12Q魚魚密級公玨水稻葉片形態(tài)相關(guān)基因DNLl和魁3例的定位和克隆郭曼指導教師姓名：芒長杰教授，揚州大堂，江蘇揚州，225009迕妲握筮撞，揚劌盤堂，婆薟揚劌，225QQ窆申請學位級別：監(jiān)學科專業(yè)名稱：笠塹道堡直壁論文提交日期：2Q15生月論文答辯日期：2Q!生旦學位授予單位：揚；!：!j盤堂學位授予日期：2Q!生魚旦答辯委員會主席：陳秀蘭2015年06

2、月2揚州大學博士學位論文基的插入。互補實驗表明：在突變體dnll背景下，導入了野生型基因OslAA6的轉(zhuǎn)基因植株，其葉片形態(tài)在整個生育期表現(xiàn)正常，根毛和側(cè)根的生長發(fā)育也恢復正常。這些結(jié)果都說明，OslAA6就是DNLl基因的候選基因。4、熒光定量RTPCR結(jié)果表明，DNLI／OslAA6基因在所有的器官中都有表達，包括根、莖、葉片、葉鞘和幼穗。進一步的將DNLl基因啟動子與GUS基因融合導入水稻植株中，該基因呈組成型表達特征，特別是在根

3、和根毛中表達最為強烈。亞細胞定位分析表明，轉(zhuǎn)DⅣ己J觸川乒G即融合基因的植株原生質(zhì)體中，僅在細胞核中能夠觀察到熒光，說明該蛋白是一個核定位蛋白。5、大田實驗和人工氣候箱實驗結(jié)果顯示，dnll突變體葉片形態(tài)受溫度調(diào)控。當環(huán)境溫度達到30℃左右時，dnll突變體長出的葉片寬度顯著變窄。進一步研究發(fā)現(xiàn)，窄葉的出現(xiàn)可能與DNLI／OslAA6的表達量有關(guān)，該基因表達量較低時會出現(xiàn)窄葉。6、用不同濃度的NAA處理931l和砌，J，結(jié)果顯示dnll

4、突變體對于外源生長素處理的敏感程度要比931lf氐，而在低濃度NAA條件下，突變體dnll的根毛缺失表型可以得到恢復。此外，重力實驗表明，dnll突變體的向重力性與野生型相比也受到了抑制。7、通過RNA干涉下調(diào)候選基因DNLI／OslAA6的表達量，可導致動態(tài)窄葉的發(fā)生和根毛的伸長受到抑制，這些表型均與突變體dnll表型相似。8、已有研究表明，OsZHDl、ADLl、SRLl和NRLl基因與葉片的形態(tài)建成有關(guān)，OsZHDl的表達量升高會

5、導致葉片卷曲，而ADLl、SRLl和NRLl基因的表達量降低會導致葉片卷曲、變窄。本研究中，ADLl、SRLl和NRLl基因在突變體dnll中表達量均比在9311中顯著降低，而OSZHDl的表達量顯著升高，說明當DNLI／OslAA6表達降低后，會引起上述基因表達的變化，暗示了這些基因可能處于DNLI／OslAA6基因的下游。與此類似，已有研究發(fā)現(xiàn)OsAPY基因與根毛的生長發(fā)育相關(guān)，當OsAPY基因表達下降時，根毛伸長受到明顯抑制。在d

6、nll突變體中，OsAPY基因的表達量也明顯下降，表明OsAPY基因也是處于DNLI／OslAA6基因調(diào)控途徑的下游。二、卷葉基因RL3俐的精細定位l、形態(tài)分析表明，與野生型9311相比，突變體rf3俐J和，如Ⅲ一2葉片顯著內(nèi)卷，株高降低，穗長變短，并且結(jié)實率降低。細胞學分析表明，突變體葉片中泡狀細胞數(shù)量減少，泡狀細胞的形態(tài)也發(fā)生了改變，推測突變體葉片卷曲可能是由于泡狀細胞數(shù)量和形態(tài)改變所致。2、以突變體，據(jù)例J『和rt3(t)2分別與