1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文p73蛋白及凋亡在膀胱移行細(xì)胞癌中表達(dá)的意義姓名：張文剛申請學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：孔垂?jié)?002.3.1胞癌。病理分期：表淺性膀胱移行細(xì)胞癌11例，浸潤性膀胱移行細(xì)胞癌33例。按WHO分級(jí)：I級(jí)17例，Ⅱ級(jí)13例，Ⅲ級(jí)14例。全部病例均經(jīng)隨訪。隨訪時(shí)間從術(shù)后當(dāng)日起至2002年3月(平均18個(gè)月)。選擇8例正常膀胱粘膜做正常對照。所有標(biāo)本均經(jīng)OCT包埋，連續(xù)切片厚度為5pan，10％福爾馬林或丙酮固定

2、。2試劑：兔抗人p73多克隆抗體，工作濃度1：50；S—P試劑盒；DAB顯色劑及凋亡試劑盒均為SantaCruz公司產(chǎn)品，以上均購自北京中山生物技術(shù)有限公司。實(shí)驗(yàn)方法1HE染色：所有標(biāo)本組織均作HE染色。2采用免疫組織化學(xué)S—P法進(jìn)行組織染色檢測p73蛋白步驟：冰凍切片，丙酮固定10分鐘，PBS洗三次，滴加3％H202，孵育5分鐘，PBS洗三次，加10％正常山羊血清，室溫十分鐘，去血清滴加稀釋一抗(1：50)，37。C孵育1小時(shí)，PBS

3、洗三次加二抗孵育10分鐘，PBS洗3次，辣根酶標(biāo)記的鏈酶卵白素37℃孵育10分鐘，PBS洗3次，DAB顯色，自來水充分沖洗，蘇木素復(fù)染，透明封片。3采用：末端原位標(biāo)記(POD法親和素辣根過氧化物酶法)步驟：冰凍切片，10％中性福爾馬林室溫固定25分鐘，PBS洗三次，放入3％也02孵育10分鐘，PBS洗三次，放入02％Triton—X一100PBS液中，室溫5分鐘，蒸餾水洗樣片3次，加標(biāo)記緩沖液，室溫15分鐘，去掉，將TdT及Diotio