1、Livin是凋亡抑制蛋白(Inhibitor of Apoptosis Protein，IAP)家族的重要成員，在多種惡性腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)，在絕大多數(shù)正常組織中不表達(dá)。Livin是一種能抑制細(xì)胞凋亡的細(xì)胞核蛋白，它能與胱天蛋白酶-3，7，9(caspase-3，7，9)結(jié)合，抑制caspase活性，阻斷死亡信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)。由于Livin具有抑制caspase的活性，因而腫瘤細(xì)胞內(nèi)Livin的過表達(dá)在對腫瘤細(xì)胞耐受藥物誘導(dǎo)的凋亡過程中起著關(guān)鍵

2、性作用。本課題組以前通過RT-PCR的方法從分子水平對Livin在膀胱移行細(xì)胞癌(Transitional Cell Carcinoma of Bladder，TCC)組織中的表達(dá)進(jìn)行檢測，證明Livin在TCC的發(fā)生發(fā)展過程中起到重要的作用。本研究進(jìn)一步從蛋白水平對livin在TCC中的表達(dá)進(jìn)行檢測，完善對人體膀胱癌組織的研究。 目的：研究一種新的凋亡抑制蛋白Livin在TCC組織中的表達(dá)，及其與TCC的病理分級、臨床分期、初

3、發(fā)復(fù)發(fā)和單發(fā)多發(fā)之間的相關(guān)性。 方法：將開放手術(shù)切除的標(biāo)本，經(jīng)冷凍、切割、定點選取等處理后，用自制的陣列制作儀，在組織陣列載體上，以一定順序，固定間距制成冰凍組織微陣列。1.采用免疫組織化學(xué)染色(Immunohistochemical staining，IHC) (通用型二步法)，在完全相同的實驗條件下檢測50例(分為初發(fā)淺表組、初發(fā)浸潤組、復(fù)發(fā)淺表組、復(fù)發(fā)浸潤組和正常對照組，每組各10例)冰凍標(biāo)本中Livin的表達(dá)情況。2.采

4、用Western blotting及蛋白灰度分析的方法，對上述50例樣本進(jìn)行定性及半定量檢測Livin的表達(dá)情況。3.利用統(tǒng)計學(xué)分析Livin的表達(dá)與TCC的病理分級、臨床分期、初發(fā)復(fù)發(fā)和單發(fā)多發(fā)之間的相關(guān)性。 結(jié)果：1、免疫組織化學(xué)：10例正常膀胱組織細(xì)胞中無livin陽性表達(dá)，而40例TCC組織標(biāo)本中有34例livin陽性表達(dá)，陽性率為85％，兩者相比差異具有顯著性(P<0.01)。按WHO病理分級分組比較發(fā)現(xiàn)Livin蛋白

5、的陽性表達(dá)率在不同分級間差異無顯著性(P>0。05)。浸澗性組和淺表性組的livin蛋白陽性率經(jīng)比較差異具有顯著性(P<0.05)。2、Western boltting：在收集的40例TCC標(biāo)本中有效標(biāo)本37例，其中l(wèi)ivin蛋白表達(dá)陽性標(biāo)本35例，陽性率為95％；正常對照組無livin蛋白表達(dá)，實驗組與對照組之間差異具有顯著性(P<0.01)。通過對35例TCC陽性標(biāo)本livin蛋白條帶及其對應(yīng)的β-actin條帶分別進(jìn)行灰度分析并算

6、出比值后，經(jīng)正態(tài)檢驗符合正態(tài)分布，按初發(fā)淺表、初發(fā)浸潤、復(fù)發(fā)淺表和復(fù)發(fā)浸潤分四組行方差分析，結(jié)果顯示四組之間差異具有顯著性，具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=5.926，P=0.003)。說明淺表組與浸潤組之間、初發(fā)組與復(fù)發(fā)組之間差異具有顯著性。按腫瘤病理分級和單發(fā)多發(fā)分組分別進(jìn)行方差分析發(fā)現(xiàn)livin的表達(dá)與腫瘤的病理分級、單發(fā)多發(fā)之間無顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論：本研究通過使用免疫組化和Western blotting兩種方法，其

7、結(jié)果一致，都說明livin在正常膀胱組織中不表達(dá)而在TCC組織中高表達(dá)，且淺表組與浸潤組、初發(fā)組與復(fù)發(fā)組之間差異具有顯著性，而在病理分級分組之間、單發(fā)多發(fā)分組之間無顯著性差異。證明Livin在TCC的發(fā)生發(fā)展過程中起著相當(dāng)重要的作用，在膀胱癌的治療過程中，livin有望成為一種高效、敏感的瘤標(biāo)，并且能對TCC的早期治療提供基因治療的新靶點。更重要的是對Livin進(jìn)行檢測可以了解患者的預(yù)后情況，有重點的對livin高表達(dá)的患者及早進(jìn)行更全