1、目的:
　　胃癌是發(fā)病率、轉(zhuǎn)移率和死亡率較高的惡性腫瘤之一。賁門癌是胃癌中最具侵襲性的類型。目前，胃賁門癌的治療仍以手術(shù)為主，缺乏有效的化療和靶向治療的藥物和方法。進(jìn)一步開展胃賁門癌發(fā)生發(fā)展機理的研究，鑒定和發(fā)現(xiàn)新的分子標(biāo)志物和治療靶點，對胃賁門癌的診斷、治療和預(yù)后十分必要。前人的研究表明，E3泛素連接酶Nedd4-1可能參與惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程。本論文重點探討Nedd4-1在胃賁門癌發(fā)生發(fā)展中的作用，確定Nedd4-1是胃賁

2、門癌患者的預(yù)后標(biāo)志物來進(jìn)一步預(yù)測患者生存率和治療效果。
　　方法:
　　1.將214例賁門癌的腫瘤組織樣品制成組織芯片，采用免疫組織化學(xué)染色法分析214例賁門癌的腫瘤組織中Nedd4-1的表達(dá)。
　　2.收集胃賁門癌患者的臨床資料，統(tǒng)計分析Nedd4-1的表達(dá)與賁門癌腫瘤的發(fā)病期關(guān)聯(lián)度。
　　3.利用慢病毒表達(dá)系統(tǒng)將胃癌細(xì)胞株AGS和N87的Nedd4-1進(jìn)行knockdown,采用Western blottin

3、g技術(shù)對Nedd4-1的knockdown效果進(jìn)行鑒定。
　　4.采用細(xì)胞愈合實驗和Transwell實驗確定Nedd4-1在胃癌細(xì)胞遷移和侵襲中的作用。
　　結(jié)果:
　　1.我們對214例胃賁門癌組織切片進(jìn)行初步的染色分析，結(jié)果表明Nedd4-1在83％的賁門癌組織中過表達(dá)。
　　2.Nedd4-1陰性的GCA患者5年生存率高達(dá)96％。Log-rank分析表明Nedd4-1的表達(dá)與患者累積生存率成負(fù)相關(guān)（x2=

4、21.885，p＜0.001）。多因素Logistic回歸分析顯示Nedd4-1過表達(dá)的TNMⅠ-Ⅲ期GCA患者具有極低的生存率，其風(fēng)險比HR為0.068，p為0.008。統(tǒng)計分析Nedd4-1表達(dá)與臨床病理資料的相關(guān)性顯示，Nedd4-1表達(dá)與TNM分期密切相關(guān)(p＜0.001)。
　　3.在胃癌細(xì)胞AGS和N87細(xì)胞株中，成功建立穩(wěn)定Nedd4-1-knockdown細(xì)胞株。
　　4.敲低Nedd4-1表達(dá)導(dǎo)致胃癌AGS

5、和N87細(xì)胞遷移和侵襲消失以及表皮生長因子刺激的細(xì)胞遷移和侵襲能力顯著降低。
　　結(jié)論:
　　E3泛素連接酶Nedd4-1在83％賁門癌腫瘤樣本中過表達(dá)。Nedd4-1表達(dá)與賁門癌患者的生存率呈負(fù)相關(guān)。Nedd4-1陰性的賁門癌患者有較高的存活率，表明Nedd4-1可用于賁門癌患者術(shù)后生存的預(yù)測。Nedd4-1過表達(dá)與TNM期密切相關(guān)，Nedd4-1敲低細(xì)胞的遷移和侵襲能力顯著降低，表明Nedd4-1在賁門癌的轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作