1、目的:研究新型免疫穩(wěn)態(tài)分子TIPE2在從胃炎到胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的功能，并試圖解析TIPE2抑制胃上皮細胞增殖的分子機制，從而為胃部疾病發(fā)生發(fā)展機制的研究提供新的線索。
　　 方法:
　　 1.組織水平上，以免疫組織化學方法檢查胃炎胃癌組織中TIPE2蛋白表達情況。同時提取組織RNA，通過qRT-PCR方法檢測mRNA水平上TIPE2的表達，以及與細胞增殖相關的分子N-ras，p21CIP1/WAF1，p53，p27，B

2、cl-2等的表達情況;
　　 2.細胞水平上，采用人TIPE2高表達質粒pRK5-tipe2轉染胃上皮細胞系，在細胞內過表達TIPE2，檢測TIPE2在胃上皮細胞增殖、細胞遷移中的作用:
　　 (1)質粒轉染:將TIPE2高表達質粒pRK5-tipe2及其對照質粒pRK5-mock轉染胃上皮細胞系AGS和BGC-823，分別于48小時、72小時后收集細胞，提取RNA和蛋白。通過qRT-PCR和Westernblottin

3、g在mRNA水平和蛋白水平檢測TIPE2的表達，并評估質粒轉染的效率。
　　 (2)細胞增殖能力檢測:不同濃度梯度的TIPE2表達質粒及其對照質粒分別轉染AGS和BGC-823細胞系，于48小時進行細胞計數(shù)，以每孔300個細胞的比例加入六孔板中，培養(yǎng)至形成肉眼可見的克隆，比較對照組和實驗組的差異。
　　 (3)細胞轉移能力檢測:培養(yǎng)高表達TIPE2的AGS和BGC-823細胞，以藍色無菌槍頭劃線，顯微觀察劃線區(qū)域細胞生長

4、情況;
　　 3.研究TIPE2對細胞周期的影響:TIPE2表達質粒分別轉染AGS和BGC-823細胞24小時、48小時和72小時，以流式細胞術(FCS)分析這些細胞所處周期的變化;
　　 4.生物芯片分析TIPE2抑制細胞增殖的可能分子機制:AGS細胞在轉染TIPE2高表達質粒后，進行表達譜生物芯片分析，并以qRT-PCR和Westernblotting方法對變化顯著的靶基因及其通路相關分子在mRNA和蛋白水平上進行驗

5、證。
　　 結果:
　　 1.免疫組化結果顯示TIPE2在胃部的正常組織有高表達，但在胃部慢性炎癥組織中表達降低，在胃癌組織中無表達;qRT-PCR從mRNA水平驗證了免疫組化的結果，證明在胃部疾病發(fā)生發(fā)展時TIPE2表達確實發(fā)生變化;
　　 2.胃上皮細胞轉染TIPE2表達質粒后，在蛋白水平上TIPE2表達量顯著升高;同時能夠檢測到細胞克隆形成能力明顯受到抑制，但在傷口愈合實驗中實驗組和對照組差別不大，表明TI

6、PE2對胃上皮細胞增殖抑制作用大，而對胃上皮細胞遷移能力的作用效果小。
　　 3.FCS結果顯示TIPE2的過量表達能夠抑制S期細胞的比例，使細胞停留在G1期，表明TIPE2通過抑制細胞進入S期從而抑制胃上皮細胞的增殖。
　　 4.生物芯片分析以及蛋白分析的結果表明，TIPE2高表達引發(fā)細胞增殖相關的分子N-ras，p21CIP1/WAF1，p27，p53和CDK2表達升高，抑制凋亡基因Bcl-2的表達。