1、面神經是周圍神經中重要的一支，支配人的面部表情，在外傷、手術、炎癥或腫瘤等情況下較易受到損傷，損傷后雖然可通過外科手術將其修復，但面部運動功能卻常常難以完全恢復正常，術后容易產生聯帶運動、半面痙攣等面癱后遺癥，直接或間接地影響了患者的生活質量。
　　 體外研究表明各種外源性神經營養(yǎng)因子能誘導再生軸突的生長方向，并證實神經元軸突生長方向趨向于高濃度梯度的神經營養(yǎng)因子方向。膠質細胞源性神經營養(yǎng)因子(GDNF)是目前所發(fā)現的對運動神經

2、作用最強的神經營養(yǎng)因子。研究中發(fā)現面神經軸突的錯向再生與膠質細胞源性神經營養(yǎng)因子濃度呈濃度依賴性關系，一定濃度的GDNF對周圍神經有明顯的減少錯向再生的作用。
　　 在面神經損傷后修復過程中，人工生物導管因其供體來源廣泛、無免疫反應、減少周圍組織疤痕侵入、生長導向性好、隨意塑形、可以添加多種活性物質等受到越來越多的重視。其修復的神經缺損距離長，效果接近自體神經移植。但如何將外源性神經營養(yǎng)因子導入神經導管，以更有效的時間和空間特異

3、性方式釋放活性分子，一直是生物學家和工程專家共同努力的方向。
　　 本研究通過將神經營養(yǎng)因子GDNF微囊化，建立不同濃度的神經營養(yǎng)因子誘向作用評估體系，并將GDNF通過微囊的形式在神經導管內緩釋，嘗試在時間和空間上尋找一種更有效的神經營養(yǎng)因子釋放方式，評估其對面神經錯向再生的修復效果。本研究共分為三個部分。
　　 第一部分，GDNF緩釋微囊的制備及其特性的測定
　　 目的：制備目的GDNF緩釋微囊并對其特性進行測

4、定。方法：復乳溶劑揮發(fā)法制備GDNF緩釋微囊，采用60Co放射源對凍干微囊進行輻照滅菌。通過細菌學檢查評價微囊滅菌效果，光鏡、電鏡對微囊的形態(tài)和分布進行評估，計算微囊的各物理性狀，GDNF-ELISA測定其體外釋放，細胞培養(yǎng)評估其生物學活性。結果：制備并輻射滅菌后的微囊，培養(yǎng)7天無微生物生長，滅菌微囊符合無菌規(guī)定。掃描電鏡下見微囊形態(tài)完整，表面光滑。測得微囊粒徑大小為19.15±0.23um。GDNF緩釋微囊的產率為79.10％，微囊的

5、載藥量為0.175ug/mg，包裹率為69.6％。體外釋放實驗示GDNF緩釋微囊前3天釋放藥物總量的1/3，3天后藥物的釋放趨于穩(wěn)定，40天內絕大多數藥物從微囊相對穩(wěn)定的釋放出來。微囊內GDNF生物學活性的測定結果示陽性對照組中運動神經元突起的數量及長度與GDNF微囊組無明顯差別(P>0.05)，均優(yōu)于空白對照組中運動神經元突起的數量及長度，證明了制備的GDNF緩釋微囊中的GDNF具有生物活性。結論：采用復乳溶劑揮發(fā)法成功制備GDNF緩

6、釋微囊，并采用60Co放射源對凍干微囊進行輻照滅菌。通過對微囊特性的研究、無菌檢查和GDNF活性測定證明微囊形態(tài)良好，含有目標濃度和活性的GDNF，控釋效果理想。
　　 第二部分，GDNF緩釋微囊體外釋放對運動神經元誘向生長作用的研究
　　 目的：建立神經細胞誘向再生模型，通過誘向再生模型對所制作的GDNF緩釋微囊進行濃度篩選，以期得到對運動神經元誘向作用最佳的GDNF緩釋微囊濃度。方法：參考Cao等人方案研究建立神經細

7、胞誘向生長模型，用細胞培養(yǎng)法鑒定小室中神經細胞活性，GDNF-ELISA檢測不同分區(qū)瓊脂糖內GDNF濃度，以證實誘向小室內濃度梯度的形成；將不同濃度的微囊置于誘向小室中，來檢測不同濃度GDNFX寸神經細胞的誘向作用。結果：在誘向小室內形成濃度梯度，成功建立神經細胞誘向生長模型，誘向小室瓊脂糖無明顯細胞毒性，該模型用于神經細胞可行。在不同濃度微囊誘導運動神經元生長方面，GDNF200ng/ml組與GDNF100ng/ml組間無明顯區(qū)別，差

8、異無統(tǒng)計學差異(P>0.05)；GDNF200ng/ml組及GDNF100ng/ml組與空白對照組及GDNF50ng/ml組間比較，前兩組均明顯優(yōu)于后兩組，差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；空白對照組與GDNF50ng/ml組間差異明顯，也具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論：本部分通過建立運動神經元誘向再生模型和利用該模型對所制作的GDNF緩釋微囊進行濃度篩選，初步確立了GDNF的體外對運動神經元細胞誘向作用的最佳濃度為100ng

9、/ml。
　　 第三部分，神經橋接導管內GDNF緩釋微囊對大鼠面神經誘向再生作用的研究
　　 目的：應用含前期制備和篩選的GDNF緩釋微囊的PLGA/殼聚糖復合的神經導管來橋接大鼠面神經總干，探討面神經損傷神經誘向再生作用更有效的GDNF釋放方式。方法：通過解剖定位面神經主干及各分支走行，用冰凍切片、熒光逆行追蹤法定位面神經核在大腦中的位置及各亞核分布區(qū)域。在體研究中以實驗動物面神經橋接室內注射材料不同分為三組，空白對照

10、組、GDNF凝膠注射組及GDNF微囊注射組。術后9周，用面肌功能評價、組織學、錯向再生率、肌電圖指標等評價其面神經誘向再生和面肌功能恢復情況。結果：明確面神經主干及各分支走行，以追蹤面神經顴支和頰支來評價面神經錯向再生率。GDNF微囊組在收縮功能評分、熒光逆向追蹤計算錯向再生率、肌電圖等方面均優(yōu)于GDNF組及空白對照組(P<0.05)，差異均有統(tǒng)計學意義。結論：在可降解神經生物導管內加入GDNF緩釋微囊橋接被切斷的成年SD大鼠面神經主干