1、背景：肺癌已經(jīng)成為全世界最常見的惡性腫瘤，在惡性腫瘤相關死亡原因中占第一位。目前肺癌的治療是以綜合治療為主，化學治療在肺癌治療中有著重要地位，耐藥性產生是化療失敗的主要原因之一。克服耐藥性的方法之一是使用逆轉劑，在肺癌治療中，DDP是主要的化療藥物，易產生耐藥，影響化療效果。重組人血管內皮抑素（恩度Endostar）作為一種血管內皮抑制劑，具有靶向明確、毒副作用小、不產生耐藥性等特點，與化療聯(lián)合可增加化療療效。Endostar化療增效可

2、能與其逆轉腫瘤細胞對化療藥物的耐藥性有關。本研究主要探討重組人血管內皮抑素（恩度Endostar）對DDP耐藥性的逆轉作用及其機制，進一步探討Endostar化療增效的機制。 目的：探討重組人血管內皮抑素（恩度Endostar）逆轉A549/DDP細胞耐藥的發(fā)生及逆轉機制。 方法：本實驗采用人肺腺癌細胞株A549及耐藥細胞株A549/DDP作為研究對象，以DDP與Endostar兩者聯(lián)合及單獨給藥的方式分別作用于人肺腺癌

3、細胞株A549及耐藥細胞株A549/DDP，作用時間72小時，觀察不同給藥方式在同株細胞之間的不同及不同株細胞間差別。采用MTT法檢測Endostar對A549/DDP細胞耐藥性的逆轉作用；用流式細胞儀測定A549/DDP組、DDP組、Endostar聯(lián)合DDP組分別作用于A549/DDP細胞后的相對熒光強度；RT-PCR法檢測DDP組、Endostar聯(lián)合DDP組、Endostar組、分別作用于A549/DDP細胞后的耐藥基因的mRN

4、A表達情況，并且設立A549細胞對照組、A549/DDP細胞對照組，同時也檢測對照組的耐藥基因的mRNA表達情況，檢測的耐藥基因包括：谷胱甘肽-S-轉移酶（GST）、拓撲異構酶Ⅱ（TOPO-Ⅱ）及肺耐藥蛋白（LRP）。 結果： 1.DDP對A549細胞半數(shù)抑制濃度（IC50）為（0.72±0.05）ug/ml，對A549/DDP半數(shù)抑制濃度（IC50）為（11.54±0.64）ug／ml?？梢姡珹549/DDP對DDP的

5、耐藥指數(shù)為16。Endostar聯(lián)合DDP對A549/DDP半數(shù)抑制濃度（IC50）為（2.0±0.1）ug／ml。逆轉倍數(shù)（RF）為5.77，相對逆轉率（RRR%）為88.2%，提示Endostar具有逆轉A549/DDP細胞耐藥的作用。Endostar聯(lián)合DDP對A549細胞半數(shù)抑制濃度（IC50）約為（0.25±0.06）ug/ml，提示Endostar與DDP在體外有明顯的協(xié)同作用。 2.流式細胞儀結果顯示DDP熒光強度

6、：單藥DDP組、A549/DDP對照組、Endostar聯(lián)合DDP組的相對熒光強度分別是：1618±82.31、974±13.45、2958±63.96，統(tǒng)計學分析P<0.05，提示Endostar可以增加細胞內的鉑含量，增加治療療效。 3.RT-PCR檢測結果顯示：A549/DDP細胞內的GST、TOPO-Ⅱ基因的mRNA表達均較A549細胞高，DDP聯(lián)合Endostar組處理后的A549/DDP細胞內GST、TOPO-Ⅱ基因

7、的mRNA表達均有明顯下降，各組比較均P（0.05，有統(tǒng)計學意義。各組細胞中均有LRP的表達，A549/DDP細胞中LRP表達較A549細胞高，經(jīng)Endostar聯(lián)合DDP處理后，A549/DDP細胞中的LRP的表達略下降，各組比較均P>0.05，無統(tǒng)計學意義。 結論：Endostar能逆轉A549/DDP對DDP的耐藥性，Endostar逆轉DDP耐藥性的機制可能是減少A549/DDP細胞內GSH和TOPO-Ⅱ基因的mRNA表