1、第一部分藤黃酸抑制膀胱癌T24細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡的機(jī)制研究
　　目的:研究藤黃酸(gambogicacid,GA)對(duì)膀胱癌T24細(xì)胞增殖和凋亡的影響。方法:采用不同濃度的GA作用膀胱癌T24細(xì)胞后,在體外通過(guò)CCK-8比色法分析細(xì)胞的增殖情況;AnnexinV-FITC/PI雙染和流式細(xì)胞儀(FCM)分析細(xì)胞的凋亡情況;Hoechst33258熒光染色法觀察T24細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化;Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)T24細(xì)胞侵襲能

2、力的變化;Westernblot檢測(cè)細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白XIAP、cIAP-1、cIAP-2、caspase3、caspase8以及caspase9的表達(dá)變化。結(jié)果:GA抑制膀胱癌T24細(xì)胞的增殖和促凋亡,作用呈濃度依賴性,與空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CCK-8法檢測(cè)結(jié)果表明,GA的IC50是2.1μmol/L,并當(dāng)濃度>1μmol/L時(shí),細(xì)胞的增殖能力受到明顯抑制。Hoechst33258熒光染色法觀察凋亡細(xì)胞核呈固縮

3、濃染,或呈碎塊狀致密濃染,并與GA的濃度梯度呈正相關(guān)。FCM法檢測(cè)結(jié)果顯示,GA處理后的膀胱癌T24細(xì)胞凋亡峰明顯(當(dāng)GA濃度>2.5μmol/L時(shí),凋亡存活率<45％)。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)顯示隨著GA處理>0.25μmol/L(侵襲)或0.5μmol/L(遷移)時(shí),T24和BIU-87細(xì)胞的侵襲力和遷移力受到明顯抑制(>50%),并與濃度呈負(fù)相關(guān)。Westernblot進(jìn)一步表明,GA能夠競(jìng)爭(zhēng)性影響T24細(xì)胞中XIAP、cIA

4、P1、caspase3、caspase8、caspase9的表達(dá)水平(P<0.05),但是對(duì)cIAP2的表達(dá)沒(méi)有明顯影響(P>0.05)。結(jié)論:GA抑制人膀胱癌T24細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)凋亡,可能與通過(guò)下調(diào)XIAP和c-IAP1表達(dá)、激活caspase-3、caspase-8以及caspase-9而進(jìn)入凋亡通路的級(jí)聯(lián)反應(yīng)有關(guān),而與c-IAP2的產(chǎn)生無(wú)關(guān)。
　　第二部分藤黃酸誘導(dǎo)膀胱癌T24細(xì)胞自噬及其相關(guān)機(jī)制的探究
　　目的:探討

5、藤黃酸(gambogicacid,GA)誘導(dǎo)膀胱癌T24細(xì)胞自噬及其機(jī)制。方法:采用不同濃度的GA作用膀胱癌T24細(xì)胞后,在體外通過(guò)CCK-8比色法分析細(xì)胞的增殖情況;Westernblot檢測(cè)細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白P53、Bcl-2、Beclin-1的表達(dá)變化;激光共聚焦顯微鏡觀察經(jīng)不同濃度GA誘導(dǎo)的T24細(xì)胞促自噬現(xiàn)象。結(jié)果:GA>0.5μmol/L時(shí),誘導(dǎo)膀胱癌T24細(xì)胞自噬峰明顯(自噬率>47%),并且這種促自噬作用與GA呈濃度依賴

6、性,與空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CCK-8法檢測(cè)結(jié)果表明,GA的IC50是2.1μmol/L,并當(dāng)濃度>1μmol/L時(shí),細(xì)胞的增殖能力受到明顯抑制。Westernblot顯示,GA能夠下調(diào)T24細(xì)胞中MDM2、Bcl-2以及升高P53和Beclin1蛋白的表達(dá)水平(P<0.05)。結(jié)論:GA可抑制人膀胱癌T24細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)自噬作用,可能與通過(guò)下調(diào)MDM2和Bcl-2及上調(diào)P53的表達(dá),進(jìn)一步激活Beclin-1而進(jìn)