應用實時定量PCR技術對支氣管哮喘患兒STAT1的表達水平的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、[目的]
   1.比較廣東深圳哮喘患兒與非哮喘疾病患兒的外周血STAT1基因表達的差異;
   2.探討STAT1基因與廣東深圳地區(qū)哮喘患兒的相關性,進一步研究小兒哮喘的病因和病理生理機制,為評估小兒哮喘風險度提供有力依據(jù)。
   [方法]
   本實驗采用病例-對照研究方法。于采血當日的同一時間抽取3ml血液,在2小時內(nèi)分離淋巴細胞,并保存于Trizol中,將30例哮喘患幾RNA歸為實驗組,將22例非

2、哮喘疾病患兒RNA歸為對照組,冰凍運輸至深圳市欣海凌生物科技有限公司。通過實時定量聚合酶鏈反應(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)進行STAT1基因的分析:總RNA提取和純化,電泳鑒定,反轉(zhuǎn)錄,擴增效率一致性檢測,RT-PCR擴增。運用標準曲線、融解曲線、擴增曲線對STAT1基因進行分析,利用公式RQ=2-△△CT對兩組患兒該基因進行相對定量分析。同時,對兩組實驗對象年齡進行差異性分析

3、。
   [結(jié)果]
   1.哮喘組與對照組之間的年齡無統(tǒng)計學差距,具有可比性。
   2.擴增效率一致性分析說明STAT1和管家基因β-actin的擴增效率一致,可以利用公式2-△△CT×100%進行實驗的結(jié)果分析。
   3.哮喘組STAT1 mRNA表達水平明顯高于對照組(3.01±2.66,0.76±0.68),兩組之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
   [結(jié)論]
   ST

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