1、本論文對(duì)常見的三種心臟疾?。ü谛牟?、心臟瓣膜病以及先天性心臟病）的不同方面分別進(jìn)行了研究。論文第一部分對(duì)治療冠心病的冠狀動(dòng)脈旁路移植外科手術(shù)中移植血管的功能進(jìn)行了藥理學(xué)研究。第二部分對(duì)心臟瓣膜病進(jìn)行了差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究，同時(shí)對(duì)可能與先天性心臟病相關(guān)的PLAGL1基因進(jìn)行了突變分析的研究。
　　第一部分血管功能藥理學(xué)與冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)
　　研究背景及目的:
　　移植血管痙攣仍然是冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)中的挑戰(zhàn)。臨床上鈣拮抗

2、劑常用于治療冠心病患者。本部分我們將對(duì)新型第三代二氫吡啶類鈣拮抗劑阿折地平在人體內(nèi)乳動(dòng)脈中對(duì)于血管收縮的抑制效應(yīng)進(jìn)行研究。
　　內(nèi)皮細(xì)胞胞內(nèi)的鈣調(diào)節(jié)依賴于瞬時(shí)受體電位通道(TRPs)。標(biāo)準(zhǔn)型瞬時(shí)受體電位離子通道(TRPCs)目前被認(rèn)為是血管內(nèi)皮細(xì)胞中最重要的鈣離子透過性陽(yáng)離子通道而TRPC3通道被報(bào)道在動(dòng)物動(dòng)脈中與血管的舒張功能相關(guān)。然而，TRPCs在人體動(dòng)脈中的作用尚不明確。因此我們對(duì)科研假說，標(biāo)準(zhǔn)型瞬時(shí)受體電位離子通道在人體動(dòng)

3、脈中發(fā)揮作用，進(jìn)行了驗(yàn)證。
　　實(shí)驗(yàn)方法:
　　離體的內(nèi)乳動(dòng)脈環(huán)（n=68，來自28個(gè)進(jìn)行冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)的患者）在myograph上進(jìn)行兩方面研究:阿折地平對(duì)KCl和U46619預(yù)收縮的內(nèi)乳動(dòng)脈的舒張作用以及在正常血藥濃度時(shí)阿折地平對(duì)收縮的抑制作用。
　　人體內(nèi)乳動(dòng)脈環(huán)（n=42，來自28個(gè)進(jìn)行冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)的患者）按如下方法在myograph上進(jìn)行研究:分別作出以U46619(-8 log M)預(yù)收縮后乙酰膽

4、堿的濃度依賴性舒張曲線，記錄在加入SKF96365(10μmol/L)或者Pyr3(3μmol/L)孵育前后曲線的變化。同時(shí)利用Western Blot和免疫組化對(duì)TRPC3蛋白的表達(dá)進(jìn)行鑒定。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　阿折地平能夠幾乎完全舒張KCl(96.5％±0.7％)或U46619(96.5％±1.4％)預(yù)收縮的人體內(nèi)乳動(dòng)脈(n=8)且對(duì)KCl的敏感性相對(duì)U46619更高(EC50∶-7.49±0.21 vs-6.03±0

5、.11 logM，p＜0.01）;預(yù)孵育阿折地平(-6.1 log M)可以有效的抑制KCl(最大收縮值從25.8±2.2 mN下降至16.0±1.5 mN，p＜0.01)或U46619(最大收縮值從30.6±4.0 mN下降至16.5±2.2 mN，p＜0.05)引起的人體內(nèi)乳動(dòng)脈收縮。
　　由乙酰膽堿引起的最大舒張值由于非特異性陽(yáng)離子通道抑制劑SKF96365(48.2±3.7 vs.66.0±0.9％ in control，

6、P＜0.01)或TRPC3通道特異性抑制劑Pyr3(58.4±2.3％ vs.67.7±1.1％ in control，P＜0.01)而明顯減小。同時(shí)，在人體內(nèi)乳動(dòng)脈中檢測(cè)到TRPC3通道蛋白的表達(dá)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論:
　　阿折地平對(duì)于不同類型的血管收縮劑在人體內(nèi)乳動(dòng)脈中引起的收縮均具有有效的抑制作用。因此，阿折地平應(yīng)用于冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)患者有望可以有效治療和預(yù)防移植血管的痙攣。
　　TRPC3通道存在于人體內(nèi)乳動(dòng)脈中

7、，并且在乙酰膽堿引起的內(nèi)皮依賴性舒張作用中發(fā)揮功能。本部分研究提示TRPC3可能成為在內(nèi)皮功能障礙疾病如冠心病中潛在的保護(hù)內(nèi)皮功能以改善移植血管遠(yuǎn)期通暢率的靶點(diǎn)。
　　第二部分重大心臟疾病的致病基因和蛋白質(zhì)組學(xué)的研究
　　研究背景及目的:
　　心臟瓣膜病的遺傳基礎(chǔ)和蛋白質(zhì)組學(xué)研究能夠?yàn)樵\斷和治療此類疾病提供重要信息。然而，關(guān)于心臟瓣膜病(VHD)包括風(fēng)濕性(RVD)和退行性心臟瓣膜病(DVD)生物標(biāo)記物的研究尚不明確。

8、本部分實(shí)驗(yàn)意在探索血漿中表達(dá)量變化與心臟瓣膜病的病理變化相關(guān)的蛋白質(zhì)。
　　室間隔缺損(VSD)是最常見的先天性心臟病之一。許多遺傳學(xué)研究提示PLAGL1基因與先天性心臟病的病因?qū)W相關(guān)。本部分的研究意在鑒別PLAGL1基因中潛在的致病突變，為單純性室間隔缺損的病因?qū)W研究提供參考。
　　實(shí)驗(yàn)方法:
　　采用雙向電泳聯(lián)合質(zhì)譜的方法對(duì)RVD、DVD和正常人群對(duì)照組的血漿進(jìn)行差異蛋白質(zhì)的檢測(cè)。同時(shí)對(duì)找出的差異蛋白中可能與VHD

9、病理變化相關(guān)的蛋白質(zhì)進(jìn)行ELISA驗(yàn)證。
　　300例單純性VSD患者和300例健康人群PLAGL1基因中兩個(gè)編碼蛋白的外顯子經(jīng)PCR擴(kuò)增后，PCR產(chǎn)物采用ABI公司3730自動(dòng)測(cè)序儀測(cè)序。應(yīng)用CLCworkbench software對(duì)PLAGL1蛋白進(jìn)行多物種氨基酸保守性分析。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　雙向電泳聯(lián)合質(zhì)譜共找出差異蛋白點(diǎn)18個(gè)，包括14個(gè)蛋白質(zhì)或者多肽。對(duì)兩個(gè)上調(diào)的（補(bǔ)體C4A和碳酸酐酶1）和三個(gè)下調(diào)的（

10、血清鐵傳遞蛋白、alpha-1抗胰凝乳蛋白酶和波連蛋白）可能與VHD病理變化相關(guān)的蛋白質(zhì)進(jìn)行ELISA驗(yàn)證。補(bǔ)體C4A在RVD病人血漿中含量(715.8±35.6 vs.594.7±28.2 ng/ml，n=40，P=0.009)以及碳酸酐酶1在DVD病人血漿中含量(237.70±15.7 vs.184.7±10.8 U/L，n=40，P=0.007)均較正常對(duì)照組顯著升高。血清鐵傳遞蛋白在RVD病人血漿中含量(2.36±0.20 vs

11、.2.93±0.16 mg/ml，n=40，P=0.025)以及alpha-1抗胰凝乳蛋白酶在RVD病人血漿中含量(370.0±13.7 vs.413.0±11.6μg/ml，n=40，P=0.019)較正常對(duì)照組顯著降低。此外，波連蛋白在RVD病人(281.3±11.0 vs.323.2±10.0μg/ml, n=40, P=0.006)和DVD病人(283.6±11.4 vs.323.2±10.0μg/ml，n=40，P=0.011

12、)血漿中含量均較正常對(duì)照組顯著降低。
　　在PLAGL1基因兩個(gè)編碼蛋白的外顯子中未檢測(cè)到任何錯(cuò)義突變或移碼突變，只在編碼蛋白的外顯子2中檢測(cè)到一個(gè)同義突變(c.486A＞G，p.E162E)。突變位置的密碼子翻譯的谷氨酸在與其他物種的比對(duì)中顯示具有保守性。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論:
　　補(bǔ)體C4A在RVD病人血漿中含量的上升，碳酸酐酶1在DVD病人血漿中含量的上升，血清鐵傳遞蛋白在RVD病人血漿中含量的下降以及alpha-1抗