ALLN、UPFⅡ單用及聯(lián)用對去血清饑餓誘導大鼠骨骼肌細胞凋亡降解的影響及機制.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討鈣蛋白酶抑制劑ALLN(N-acetyl-Leu-Leu-Norleucinal)與外源性泛素-蛋白酶體片段Ⅱ(Ubiquitin/Proteasome FractionⅡ,UPFⅡ)單用及聯(lián)用對去血清饑餓大鼠骨骼肌細胞凋亡降解的影響及其可能機制。
  方法:離體培養(yǎng)3-5日齡SD大鼠骨骼肌衛(wèi)星細胞,倒置顯微鏡下適時觀察、拍照、記錄骨骼肌細胞的生長狀態(tài);采用HE染色以及骨骼肌肌動蛋白單克隆抗體(α-sarcometric

2、 actin)免疫熒光方法鑒定骨骼肌細胞,待細胞培養(yǎng)成熟穩(wěn)定后調整濃度,隨機分為5組:(1)A組(完全培養(yǎng)基對照組),(2)去血清饑餓系列:B組(單純基礎培養(yǎng)基對照組)、C組(基礎培養(yǎng)基+UPFⅡ組)、D組(基礎培養(yǎng)基+UPFⅡ+ALLN組)、E組(基礎培養(yǎng)基+ALLN組);采用噻唑藍(MTT)法測定各組細胞在藥物干預72h后的生存率,采用適時熒光定量PCR法檢測各組細胞在藥物干預72h后Calpain-3、MuRF-1、Atrogin

3、-1在mRNA水平的表達情況。
  結果:1. MTT結果分析顯示:與完全培養(yǎng)基A組比較,去血清饑餓B、C、D、E組細胞生存率分別為(57.89%±5.07%)、(41.22%±4.87%)、(56.94%±6.02%)、(69.72%±6.25%),各組生存率均下降(P<0.05);E組細胞生存率較B、C、D組均高(P<0.05);D組生存率較C組高(P<0.05);B組與D組之間無明顯差異(P>0.05)。
  2.實時

4、熒光定量PCR結果顯示:與A組比較,去血清饑餓B、C、D、E組細胞Calpain-3、MuRF-1、Atrogin-1的mRNA表達量分別為23.71±0.10/23.18±0.08/22.22±0.10倍、24.52±0.07/24.10±0.07/23.29±0.05倍、23.78±0.07/23.11±0.05/22.15±0.07倍、22.60±0.04/22.37±0.10/21.65±0.08倍,差異性均顯(P<0.05);

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