1、【背景】
　　瘢痕疙瘩是整形外科較常見的疾病,其發(fā)病機(jī)制不清,缺乏理想的防治手段。近年來(lái),瘢痕疙瘩的遺傳特性成為新的關(guān)注點(diǎn),為解釋其發(fā)病機(jī)制帶來(lái)新思路。單核苷酸多態(tài)性作為第三代遺傳標(biāo)志,在瘢痕疙瘩發(fā)病機(jī)制中的作用受到廣泛關(guān)注。2010年日本學(xué)者Nakashima發(fā)現(xiàn)NEDD4基因上存在一個(gè)與瘢痕疙瘩遺傳傾向相關(guān)的SNP位點(diǎn),而NEDD4基因編碼蛋白Nedd4又與許多瘢痕疙瘩相關(guān)分子及信號(hào)通路有密切聯(lián)系,并參與其調(diào)控。故我們主要針對(duì)

2、NEDD4基因中尚未發(fā)掘的其他SNP位點(diǎn)進(jìn)行研究,以期找到解釋瘢痕疙瘩發(fā)病機(jī)制的突破口。
　　【目的】
　　通過(guò)對(duì)臨床采集的病例樣本進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,探討NEDD4(泛素連接酶E3)基因中的目標(biāo)SNP位點(diǎn)與瘢痕疙瘩遺傳傾向之間是否存在關(guān)聯(lián)性,為瘢痕疙瘩的致病機(jī)制研究提供新思路。
　　【方法】
　　在對(duì)瘢痕疙瘩診治有豐富臨床經(jīng)驗(yàn)的整形外科醫(yī)師指導(dǎo)下,我們連續(xù)收集第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院整形外科門診2011年11月至2012

3、年3月的漢族瘢痕疙瘩患者(病例組)及正常美容外科人群(對(duì)照組)的血液樣本并提取其DNA。瘢痕疙瘩病例組納入標(biāo)準(zhǔn)為:瘢痕高出表皮并明顯超出原皮損界限,且持續(xù)侵犯周圍正常皮膚組織,病程為1年以上。對(duì)照組納入時(shí)注意詢問(wèn)其外傷史及家族史,對(duì)于患有瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及有瘢痕疙瘩家族史的人群不予納入?；贜CBI中SNP數(shù)據(jù)庫(kù)提供的SNP位點(diǎn)信息,我們對(duì)NEDD4基因中的SNP位點(diǎn)進(jìn)行篩選,最終選擇了6個(gè)SNP目標(biāo)位點(diǎn):rs2303579、rs2

4、303580、rs10518830、rs8032158、rs4774833、rs17819300。其中rs2303579和rs2303580位于外顯子的錯(cuò)義編碼區(qū),rs10518830、rs4774833和rs17819300位于啟動(dòng)子區(qū),rs8032158位于內(nèi)含子區(qū)。在Sequenom公司的Mass Array MALDI-TOFMS技術(shù)平臺(tái)支持下,我們對(duì)收集的50例瘢痕疙瘩病人樣本及52例對(duì)照組樣本中的SNP目標(biāo)位點(diǎn)進(jìn)行堿基類型檢

5、測(cè)。將結(jié)果通過(guò)SPSS14.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì),分析6個(gè)SNP目標(biāo)位點(diǎn)是否與瘢痕疙瘩遺傳傾向相關(guān)聯(lián)。
　　【結(jié)果】
　　1.rs2303579和rs2303580與瘢痕疙瘩遺傳傾向具有關(guān)聯(lián)性
　　統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示,在rs2303579位點(diǎn)上,相比于攜帶TT基因型的人群,攜帶CT基因型(OR=1.56)和CC基因型(OR=2.50)的人群罹患瘢痕疙瘩疾病的可能性更高(OR>1,P=0.005);且C等位基因在病例與對(duì)照組

6、間的分布差異與瘢痕疙瘩遺傳傾向相關(guān)聯(lián)(P=0.001)。在rs2303580位點(diǎn)上,相比攜帶CC基因型的人群,攜帶CT基因型(OR=1.38)和TT基因型(OR=2.50)的人群罹患瘢痕疙瘩的危險(xiǎn)性更高(OR>1,P=0.006);同時(shí),T等位基因在組間的分布差異也與瘢痕疙瘩遺傳傾向相關(guān)聯(lián)(P=0.001)。在相加模型分析中我們觀察到,rs2303579位點(diǎn)上C等位基因(OR=2.49,P=0.002)與rs2303580位點(diǎn)上的T等位

7、基因(OR=2.44,P=0.003)均符合相加模型的假設(shè)(P<0.05),且均在瘢痕疙瘩發(fā)病中具有危險(xiǎn)性因素(OR>1)。此外在連鎖不平衡分析中,我們發(fā)現(xiàn)rs2303579和rs2303580這兩個(gè)位點(diǎn)處于強(qiáng)連鎖狀態(tài)(D’=1.000,r2=0,979)。隨后對(duì)rs2303579和rs2303580進(jìn)行單體型分析,結(jié)果顯示當(dāng)rs2303579位點(diǎn)等位基因?yàn)镃而rs2303580位點(diǎn)為T時(shí),這種單體型罹患瘢痕疙瘩的危險(xiǎn)度較高(OR=2.

8、72,P=0.0008);但是rs2303579為T而rs2303580為C的單體型則罹患瘢痕疙瘩的危險(xiǎn)度較低(OR=0.37,P=0.0008)。
　　2.rs10518830與瘢痕疙瘩遺傳傾向有關(guān)聯(lián)性
　　在rs10518830位點(diǎn)上,相比于攜帶GG基因型的人群,攜帶CC基因型的人群罹患瘢痕疙瘩疾病的可能性更高(OR=2.44,P=0.013),且C等位基因在組間的分布差異與瘢痕疙瘩遺傳傾向相關(guān)聯(lián)(P=0.001)。在相

9、加模型中,rs10518830位點(diǎn)上C等位基因符合相加模型的假設(shè),在瘢痕疙瘩發(fā)病中具有危險(xiǎn)性因素(OR=2.46,P=0.005)。
　　3.rs8032158與瘢痕疙瘩遺傳傾向性相關(guān)
　　在rs8032158位點(diǎn),相比于攜帶TT基因型的人群,攜帶CT基因型(OR=2.02)和CC基因型(OR=2.28)的人群罹患瘢痕疙瘩疾病的可能性更高(OR>1,P=0.048);且C等位基因在病例與對(duì)照組間的分布差異與瘢痕疙瘩遺傳傾向相

10、關(guān)聯(lián)(P=0.012)。在相加模型分析下,此位點(diǎn)上攜帶C等位基因符合相加模型的假設(shè),在瘢痕疙瘩發(fā)病中具有危險(xiǎn)性因素(OR=2.01,P=0.02)。
　　4.rs4774833與rs17819300與瘢痕疙瘩不具有相關(guān)性
　　在本實(shí)驗(yàn)中,rs4774833位點(diǎn)(P=0.406)與rs17819300位點(diǎn)(P=0.669)與瘢痕疙瘩遺傳易感性不相關(guān)。
　　【結(jié)論】
　　我們?cè)诓±龑?duì)照研究的基礎(chǔ)上,發(fā)現(xiàn)了NEDD4基

11、因上與瘢痕疙瘩遺傳傾向相關(guān)聯(lián)的新的功能性SNP位點(diǎn)。其中位于錯(cuò)義編碼區(qū)的rs2303579和rs2303580位點(diǎn)與瘢痕疙瘩遺傳傾向具有關(guān)聯(lián)性。這兩個(gè)位點(diǎn)堿基的改變能夠引起下游編碼氨基酸的差異,這種差異可能會(huì)影響NEDD4基因編碼的蛋白,最終參與瘢痕疙瘩的發(fā)病。位于啟動(dòng)子區(qū)的rs10518830位點(diǎn)也與瘢痕疙瘩遺傳傾向具有相關(guān)性。由于rs10518830位于調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄的區(qū)域,可能調(diào)控NEDD4基因的表達(dá)水平,所以可能參與瘢痕疙瘩的發(fā)病