1、目的:
　　1研究不同劑量益氣通絡解毒方(Yqtljdf)聯(lián)合吉非替尼(Gefitinib)含藥血清對人肺腺癌H1975細胞增殖和凋亡的影響。
　　2研究不同劑量Yqtljdf聯(lián)合Gefitinib對人肺腺癌H1975細胞BALB/c裸小鼠移植瘤生長的影響。
　　方法:
　　1 Yqtljdf低、中、高劑量(15.75,31.5,63g.kg-1)、Yqtljdf低、中、高劑量聯(lián)合Gefitinib(22.5 m

2、g.kg-1)、Gefitinib(22.5 mg.kg-1)及生理鹽水(NS)對SD大鼠灌胃,持續(xù)用藥5 d,腹主動脈穿刺取血,制備含藥血清。
　　2取對數(shù)生長期肺癌H1975細胞,分別加入含不同濃度的NS、Gefitinib、Yqtljdf低、中、高劑量及其聯(lián)合Gefitinib血清的RPMI-1640培養(yǎng)液,分別孵育24 h、48 h、72 h,CCK-8法測量每孔的吸光度(OD),計算各組細胞的增殖抑制率。
　　3取

3、對數(shù)生長期肺癌H1975細胞,分別加入含NS,Gefitinib,Yqtljdf高劑量,Yqtljdf低,中,高劑量聯(lián)合 Gefitinib的含藥血清分別作用24 h、48 h、72 h,Annexin V-FITC/PI染色,用流式細胞儀檢測細胞凋亡情況。
　　4取對數(shù)生長期肺癌H1975細胞,分別加入上述各組含藥血清干預24 h、48 h、72 h,依次固定、封閉、加一抗、加二抗等處理,應用Image pro-plus6.0病

4、理圖片處理軟件進行分析。
　　5取濃度為5×107/mL對數(shù)生長期肺癌H1975細胞0.2 mL接種BALB/c裸鼠腋窩皮下,待瘤體直徑達15mm后處死,無菌條件下取出腫瘤,制備瘤細胞懸液,再次以濃度為5×107/mL瘤細胞懸液,每只0.2 mL接種BALB/c裸鼠腋窩皮下。
　　6造模成功后隨機分為NS組、Gefitinib組、Yqtljdf高劑量組、Yqtljdf低、中、高劑量聯(lián)合Gefitinib組,分別給予上述藥物干

5、預3 w,探討Yqtljdf聯(lián)合Gefitinib對BALB/c裸鼠移植瘤生長的影響。
　　7上述藥物干預3 w后,取部分瘤組織,組織勻漿器勻漿,200目網(wǎng)篩過濾,Annexin V-FITC/PI染色,用流式細胞儀檢測瘤組織中細胞凋亡情況。
　　8免疫組化法檢測各組移植瘤瘤細胞中凋亡相關蛋白Caspase-3的表達量的變化。
　　9 Western blotting法檢測各組移植瘤瘤細胞中VEGF表達量的變化。

6、>　　結果:
　　1 Yqtljdf聯(lián)合Gefitinib組含藥血清對肺癌H1975細胞增殖抑制作用呈劑量和時間依賴性,以Yqtljdf高劑量聯(lián)合Gefitinib作用72 h抑制肺癌H1975細胞增殖作用最好,為42.86％。
　　2 Yqtljdf聯(lián)合Gefitinib組含藥血清可促進肺癌H1975細胞均凋亡,且呈劑量和時間依賴性,以10%Yqtljdf高劑量聯(lián)合 Gefitinib作用72 h誘導凋亡作用最強,為25.

7、77%。
　　3凋亡相關蛋白Caspase-3表達量與藥物劑量、作用時間呈正相關。
　　4 Yqtljdf聯(lián)合Gefitinib可抑制肺癌H1975細胞 BALB/c裸小鼠移植瘤的增長,與NS組及Gefitinib組相比,差異顯著,具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　5 Yqtljdf聯(lián)合Gefitinib可促進肺癌H1975細胞BALB/c裸小鼠移植瘤瘤細胞的凋亡,與Gefitinib組和NS組,差異顯著,具有統(tǒng)計

8、學意義(P<0.05)。
　　6各組移植瘤瘤細胞 Caspase-3蛋白表達均呈陽性,且隨藥物劑量增加 Caspase-3蛋白表達量增加,Yqtljdf高劑量聯(lián)合Gefitinib組表達最強,與NS組和Gefitinib組比較,差異顯著,具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　7 Yqtljdf聯(lián)合Gefitinib組VEGF的表達量隨藥物劑量的增加而降低,與NS組和Gefitinib組比較,差異顯著,具有統(tǒng)計學意義(P<0.