1、基因的表達(dá)和調(diào)控是生物體內(nèi)十分重要的機(jī)制之一,它是生物體代謝、發(fā)育、生殖等一系列生理活動的根本所在?；虻奶禺愋员磉_(dá)決定了生物體的特異性,一直以來都是研究的熱點(diǎn)。啟動子是直接調(diào)控基因特異性表達(dá)的重要元件,它驅(qū)動基因的表達(dá),決定了基因表達(dá)的強(qiáng)度、時(shí)間和空間等特異性。水稻中的OsWRKY13基因是一個(gè)受病原物,包括稻瘟菌和白葉枯菌,誘導(dǎo)表達(dá)的基因,同時(shí)可以在植物激素誘導(dǎo)的條件下產(chǎn)生應(yīng)答,研究它的啟動子對闡明基因功能,探索抗病途徑具有極大的意

2、義。而水稻光合系統(tǒng)Ⅱ中一個(gè)編碼10kD多聚蛋白的基因,D540,具有綠色組織特異性的表達(dá)模式,研究其啟動子對分析組織特異性表達(dá)的調(diào)控機(jī)制,預(yù)測基因的功能有著重要作用,同時(shí)利用組織特異性的啟動子可以幫助解決轉(zhuǎn)基因安全性的問題。
　　 利用篩選到的包含OsWRKY13基因編碼區(qū)的cDNA克隆,我們得到了包含完整基因信息的基因組亞克隆。經(jīng)過預(yù)測,我們截取了728 bp的啟動子片段,命名為PWRKY13。經(jīng)轉(zhuǎn)基因分析,該啟動子可以被病原

3、物和激素所誘導(dǎo)表達(dá)。在5’-末端的缺失試驗(yàn)、凝膠阻滯和定點(diǎn)突變的分析中,我們得到了一系列新的調(diào)控病原物誘導(dǎo)表達(dá)的順式作用位點(diǎn)。對這些位點(diǎn)進(jìn)行的酵母單雜交分析得到了與之結(jié)合的蛋白質(zhì)信息,通過對編碼這些蛋白質(zhì)的基因的分析,我們發(fā)現(xiàn)這些蛋白都具有病原物誘導(dǎo)的表達(dá)模式,并且在細(xì)胞核中發(fā)揮其功能,有些還具有核定位信號或DNA結(jié)合功能,這說明這些蛋白具有核轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的特征。
　　 同時(shí)還篩選到一個(gè)在綠色組織中表達(dá),在胚和胚乳中不表達(dá)的cD

4、NA克隆,它編碼一個(gè)光合系統(tǒng)Ⅱ中的10kD多聚蛋白。我們分離了該基因約2.1kb的啟動子區(qū)段,命名為PD54O。轉(zhuǎn)基因植株證明該啟動子特異性驅(qū)動外源基因在綠色組織中表達(dá),而5’-末端的缺失導(dǎo)致了組織特異性表達(dá)譜的改變,同時(shí)伴隨表達(dá)量的變化,說明了該啟動子中含有調(diào)控組織特異性表達(dá)以及正或負(fù)調(diào)控基因表達(dá)量的順式作用位點(diǎn)。通過凝膠阻滯的分析,我們確定了這些順式作用位點(diǎn),并采用定點(diǎn)突變的方法進(jìn)行了驗(yàn)證。利用這些位點(diǎn),通過酵母單雜交篩選到與之結(jié)合