1、運用組織學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等實驗方法，結(jié)合分子生物學(xué)和生理生化技術(shù)手段，對二年生黑松實生苗感染松材線蟲后的病程發(fā)展特征作了系統(tǒng)研究。結(jié)果表明： 1．不同致病力線蟲蟲株侵入2年生黑松后，引發(fā)寄主發(fā)生的組織病理學(xué)變化有差異，植株是否發(fā)病與線蟲能否在黑松體內(nèi)存活有關(guān)，而發(fā)病速度快慢則與線蟲在黑松體內(nèi)擴散速度及能否大量繁殖有直接關(guān)系。 強致病力松材線蟲的擴散主要通過軸向樹脂道在樹體內(nèi)上下擴散，通過徑向樹脂道在樹體內(nèi)外擴散，并

2、以此成為逾越形成層的通道，由于松屬植物樹脂道是遍布整個樹體的一個“管網(wǎng)系統(tǒng)”，所以線蟲擴散速度快，致病性強；弱致病力松材線蟲擴散主要在皮層中，擴散速度慢，致病速度慢。研究中未觀察到線蟲直接侵入形成層細(xì)胞，因此，形成層細(xì)胞的死亡是一個漸進(jìn)的過程，與線蟲未到達(dá)的樹脂道上皮細(xì)胞等薄壁細(xì)胞的死亡方式類似，并非松材線蟲的侵入直接造成。 2．松材線蟲侵入2年生黑松后，誘導(dǎo)寄主發(fā)生系統(tǒng)而持續(xù)的細(xì)胞程序性死亡，從而導(dǎo)致黑松整體死亡。 透

3、射電鏡觀察證實黑松感染松材線蟲后，莖中形成層細(xì)胞以及其它的薄壁細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞程序性死亡特征，變化類似于動物細(xì)胞中的細(xì)胞程序性死亡。針葉葉肉細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化與形成層細(xì)胞等薄壁細(xì)胞類似，也出現(xiàn)了細(xì)胞程序性死亡的典型特征。莖薄壁細(xì)胞和針葉葉肉細(xì)胞的這些變化暗示了2年生黑松感染松材線蟲后，植株整體發(fā)生了相應(yīng)的系統(tǒng)反應(yīng)，莖細(xì)胞的死亡與葉的枯萎不是由松材線蟲的破壞能力直接激發(fā)的，而是黑松的內(nèi)在基因程序被激活的結(jié)果。 3．TuNEL技術(shù)檢測結(jié)果

4、表明，松材線蟲侵入2年生黑松后，多數(shù)薄壁細(xì)胞的細(xì)胞核表現(xiàn)陽性反應(yīng)，說明其薄壁細(xì)胞核DNA出現(xiàn)了有序降解，進(jìn)一步證明電鏡觀察結(jié)果寄主發(fā)生了系統(tǒng)而持續(xù)的細(xì)胞程序性死亡。瓊脂糖凝膠電泳檢測未發(fā)現(xiàn)典型的DNA Ladder。 4．接種不同致病力線蟲后， 2年生黑松的水勢、根系活力變化情況表明，水分的異常代謝明顯滯后于寄主體內(nèi)細(xì)胞的大量死亡，植株的死亡是由于寄主發(fā)生系統(tǒng)而持續(xù)的細(xì)胞程序性死亡，進(jìn)一步佐證了電鏡觀察結(jié)果。 5．運用熒