1、本文以煙草葉片在MS培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織過程中，十個不同時期的愈傷組織葉片為材料，通過Hoechst 33258熒光染料染色顯微觀察結(jié)果表明：細(xì)胞核在形態(tài)上發(fā)生了典型的細(xì)胞程序性死亡(Programmed cell death，PCD)特征——縮縊變形；通過CTAB法提取愈傷組織誘導(dǎo)葉片總DNA進(jìn)行TBE瓊脂糖電泳檢測，出現(xiàn)了標(biāo)志著PCD發(fā)生的DNA片段化的梯狀圖譜，即DNA ladder，這些結(jié)果均表明了在煙草葉片愈傷組織誘導(dǎo)過程中發(fā)

2、生了細(xì)胞程序性死亡，而在誘導(dǎo)的第6個時期，即誘導(dǎo)的第13天DNA的片段化現(xiàn)象最為明顯，表明這一時期是PCD發(fā)生較為活躍的時期。 通過酶聯(lián)免疫法測定誘導(dǎo)前14天愈傷組織葉片中內(nèi)源激素ABA的含量，在誘導(dǎo)的第5時期開始出現(xiàn)大量的ABA，而在誘導(dǎo)的第6時期，即誘導(dǎo)的第13天ABA含量相對達(dá)到了峰值，這一結(jié)果表明，ABA在愈傷組織的誘導(dǎo)過程中，對PCD的發(fā)生起到了調(diào)節(jié)作用。 用RT-PCR法在誘導(dǎo)的前9個時期，即誘導(dǎo)的第3、5、

3、7、9、11、13、15、17、19天的葉片的愈傷組織中均擴(kuò)增出了細(xì)胞程序性死亡相關(guān)基因Beclin-l的cDNA片段(678bp)，經(jīng)過克隆測序表明，與煙草葉片(AY-701316)中Beclin-l基因的同源性為95％：進(jìn)一步的以RNA為探針，Northen雜交結(jié)果顯示，在誘導(dǎo)的第6時期，即誘導(dǎo)的第13天，雜交信號最為強(qiáng)烈，即Beclin-l基因表達(dá)最為強(qiáng)烈。 綜合以上結(jié)論：在煙草葉片愈傷組織誘導(dǎo)過程中伴隨PCD的發(fā)生，在此