1、胎盤缺陷與轉基因克隆牛的異常發(fā)育有關，但其具體機制目前還不清楚，而miRNAs在組織與器官發(fā)育過程中起著重要的調控作用。為了研究胎盤中miRNAs的差異表達是否與轉基因克隆牛效率低有關，我們運用二代測序技術對四組胎盤組織：1）POL轉基因克隆胎盤，其后代出生后存活；2）POD轉基因克隆胎盤，其后代在出生后兩天內死于大胎兒綜合癥；3）PCM轉基因克隆牛作為母牛自然妊娠后所生產小牛的胎盤；4）PNC一頭荷斯坦母牛經自然繁殖后所產的小牛胎盤；

2、進行了 miRNAs及 mRNAs測序分析，最后在差異表達mRNAs的基礎上，分析信號通路的變化。結果顯示在四組胎盤樣品中共有694差異表達的 miRNAs，如 miR-210，miR-155，miR-128，miR-183和 miR-145。信號通路分析結果顯示POL，POD，PCM組胎盤與PNC組胎盤相比顯著上調的通路主要包括黏著斑，ECM-受體相互作用通路，癌癥通路，肌動蛋白細胞骨架調控通路，內吞作用通路，粘附連接通路；POL，P

3、OD，PCM組胎盤與 PNC組胎盤相比顯著下調的通路主要包括瘧疾，NOD樣受體信號通路，細胞因子與細胞因子受體通路，Jak-STAT信號通路和阿米巴原蟲癥。同時我們對其中差異表達顯著的 bta-miR-708，利用三質粒包裝系統(tǒng)（PCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP， PMD2.G，PSPAX2）構建其慢病毒表達載體，并將其慢病毒表達載體轉入牛胎盤滋養(yǎng)層細胞，通過熒光定量 PCR鑒定 miR-708的表達量。結果表明構建的mi