1、本文針對贊皇棗黑腐病進行病原菌的分離回接、生物學(xué)特性、以及拮抗菌株的多重篩選研究,明確了主要的致病菌,并篩選獲得了具有研究應(yīng)用價值的拮抗鏈霉菌AC01、AC07和拮抗芽孢桿菌B01、B07。同時,還對獲得的拮抗菌進行了發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件優(yōu)化。結(jié)果如下:
　　1.連續(xù)三年(2011-2013)贊皇棗黑腐病病菌分離、回接試驗表明:莖點霉菌(Phoma sp.)和鏈格孢菌(Alternaria sp.)的平均分離率分別為35.67％和

2、40.00%,且這兩株菌均為贊皇棗黑腐病的主要致病菌。
　　2.莖點霉菌(Phoma sp.)生物學(xué)特性為:SCS培養(yǎng)基為菌絲生長最適培養(yǎng)基,葡萄糖和尿素分別為最佳碳、氮源;最佳生長條件 pH6-9,24℃,持續(xù)黑暗。PDA培養(yǎng)基為分生孢子產(chǎn)生的最適培養(yǎng)基,甘油和硝酸銨為最適碳、氮源;最佳產(chǎn)孢條件為pH8,32℃,光、暗交替。
　　3.鏈格孢菌(Alternaria sp.)生物學(xué)特性為:PDA培養(yǎng)基為菌絲生長最適培養(yǎng)基,葡

3、萄糖和尿素分別為最佳碳、氮源;最佳生長條件為pH6-10,24-32℃,光暗交替或持續(xù)黑暗。PD A培養(yǎng)基為分生孢子產(chǎn)生的最適培養(yǎng)基,甘油、甘露醇為最適碳、氮源;最佳產(chǎn)孢條件為pH10,28℃,持續(xù)黑暗。
　　4.以莖點霉菌(Phoma sp.)為靶標(biāo)的多重篩選結(jié)果表明:芽孢桿菌B01和鏈霉菌AC01抑菌效果顯著,持效性好。
　　菌株B01的最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基為:蔗糖20g/L、花生粉26g/L、酵母粉5.5g/L、KH2PO4

4、0.3g/L、MgSO40.2g/L、CaCO40.4 g/L、MnSO40.02g/L、FeSO40.02g/L;最佳發(fā)酵條件為:種子液濃度1.5~2×107~108cfu/ml時,接種量4%(V/V),裝液量20ml/250ml三角瓶,原始pH值6.0,發(fā)酵溫度24℃,發(fā)酵時間48h。
　　菌株AC01的最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基為:高粱粉42g/L,大豆粉12g/L,(NH4)2SO43.7g/L, CaCO43.2g/L, NaCl1

5、.7g/L,酵母粉2.0g/L;最佳發(fā)酵條件為:種子液濃度1.5~2×107~108cfu/ml時,接種量3%(V/V),裝液量50ml/250ml三角瓶,原始pH7.0,發(fā)酵溫度28℃,發(fā)酵時間108 h。
　　5.以鏈格孢菌(Alternaria sp.)為靶標(biāo)的多重篩選結(jié)果表明:芽孢桿菌B07和鏈霉菌AC07抑菌效果顯著,持效性好。
　　菌株 B07發(fā)酵的最優(yōu)培養(yǎng)基為:紅薯粉2.0g/L,牛肉膏10g/L,NaCl10

6、g/L, MnSO40.02g/L;最佳發(fā)酵條件為:種子液濃度1.5~2×107~108cfu/ml時,接種量5%(V/V),裝液量40ml/250ml,原始pH值7.0,發(fā)酵溫度32℃,時間72h。
　　菌株AC07的最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基為:麥芽糖57g/L,大豆粉27g/L,(NH4)2SO41.7g/L, CaCO42.2g/L, NaCl1.7g/L,酵母粉2.0g/L;最佳發(fā)酵條件為:種子液濃度1.5~2×107~108cfu