1、慢性粒細胞性白血?。╟hronicmyeloidleukemia，CML）是一種多功能造血干細胞增殖異常引起的惡性克隆性疾病，CML發(fā)病率國外報道為1/10萬，國內為3.6/10萬，全球年發(fā)病數(shù)約占成人白血病的15％，在成人白血病中排第三位，且具有增高趨勢。
　　 伊馬替尼（Imatinib，IM）是治療慢性期慢性粒細胞性白血?。–ML-CP）最有效的酪氨酸激酶抑制劑（TKI）。IM的臨床應用，為CML的治療開辟了一條新的途徑。

2、盡管伊馬替尼可以使多數(shù)CML患者獲得較為持久的細胞遺傳學反應，但在獲得最初的有效反應之后，部分患者會出現(xiàn)復發(fā)，這種現(xiàn)象在CML加速期、急變期和Ph+患者中尤甚。而Ab1激酶區(qū)域的點突變是引起IM治療失敗及復發(fā)的最主要原因。
　　 本實驗首先用臺盼藍拒染法觀察IM對各種Bcr-Ab1細胞株的生長抑制作用，結果發(fā)現(xiàn)野生型的細胞對IM有敏感性，而其他含各種Bcr-Ab1點突變細胞對IM有一定的耐藥性，即為IM耐藥細胞株。因此，尋找其他

3、有效的治療藥物是臨床上急需解決的問題。
　　 三氧化二砷（ATO）治療急性早幼粒白血病（APL）已取得很好的療效，并且作為一種多靶向藥物ATO在治療其他類型的白血病和實體瘤方面也取得了一定的療效。本實驗將試圖研究三氧化二砷（ATO）對包括T3151點突變在內的Bcr-Ab1突變細胞株生長抑制作用，并探討其作用機制。
　　 本實驗采用臺盼藍拒染法觀察ATO對Bcr-Ab1野生型細胞株和伊馬替尼（IM）耐藥細胞株的生長抑制作

4、用。研究發(fā)現(xiàn)ATO對Bcr-Ab1野生型和IM耐藥細胞株的生長抑制作用均呈現(xiàn)劑量依賴性，且含Bcr-Ab1點突變的耐藥細胞株對ATO格外敏感，其ATO的IC50值均比其對應的Bcr-Ab1野生型細胞株低2.04～4.63倍。但無點突變的K562R細胞株的IC50值卻與野生型K562細胞的無顯著差異。
　　 95％的CML患者造血干細胞中存Bcr-Ab1融合基因，而Bcr-Ab1嵌合蛋白位于復雜信號網絡的中樞部位，其過度的酪氨酸激

5、酶活性使得其自身及其下游信號通路過度激活，從而抑制細胞凋亡。本實驗用熒光定量PCR法檢測ATO作用于Bcr-Ab1野生型細胞株和伊馬替尼（IM）耐藥細胞株后，細胞內Bcr-Ab1mRNA基因拷貝變化，并用Westernblot法檢測ATO處理后細胞內Bcr-Ab1蛋白表達的變化。結果發(fā)現(xiàn)ATO處理的兩種細胞Ber-Ab1mRNA無顯著變化（p>0.05），然而能下調Bcr-Ab1野生型細胞株細胞的Bcr-Ab1蛋白水平，而且對伊馬替尼（

6、IM）耐藥細胞株也有相同作用。鑒于Bcr-Ab1嵌合蛋白在CML發(fā)病過程中的重要作用，我們推測，ATO下調Bcr-Ab1蛋白的特殊機制可能是其作用于IM耐藥細胞株原因之一。
　　 通過臺盼藍拒染法觀察到Bcr-Ab1野生型和含Bcr-Ab1點突變的耐藥細胞株對ATO敏感性存在差異，為了研究這種差異產生的原因，我們用DTNB比色法測定細胞內谷胱甘肽含量（GSH），結果顯示：含有Bcr-Ab1點突變的細胞株內GSH含量顯著低于其對應

7、的野生型細胞（p=0.00106～0.0358），而K562和K562R細胞中GSH含量無顯著差異（p=0.315）。并用AnnexinV&PI染色檢測用GSH生物合成抑制劑BSO處理各種細胞株后細胞的凋亡情況，發(fā)現(xiàn)BSO處理后細胞對ATO的敏感性均顯著增加。與Bcr-Ab1野生型細胞株相比，ATO對含有點突變的細胞株生長抑制作用更為顯著，這可能與細胞內GSH的含量有關。但究競是什么原因使得突變細胞內GSH含量降低目前我們還不得而知，這