1、由革蘭氏陰性黃單胞桿菌水稻致病變種Xanthomonas oryzae pv.oryzicola(Xoc)引起的水稻細菌性條斑?。ê喎Q水稻條斑?。┦悄壳八旧a上最主要的細菌性病害之一。與水稻白葉枯菌不同，水稻條斑菌在葉肉細胞間隙繁殖并致病，在水稻遺傳種質中也尚未鑒定主效抗性基因，推測與病原菌中可能存在某些特異效應因子可抑制寄主的抗性反應相關。
　　本課題前期常清樂(2013)通過白葉枯菌PXO99a和本生煙的互作激發(fā)過敏反應系統(tǒng)

2、在PXO99a中篩選條斑病菌RS105的基因組文庫，發(fā)現(xiàn)攜帶有條斑病特異效應分子avrRxo1基因片段的克隆能抑制PXO99a在煙草上的HR反應。并通過相關實驗證明了決定avrRxo1抑制子功能與無毒基因功能受不同結構域決定。同時，以avrRxo1為誘餌蛋白，通過酵母雙雜交技術從粳稻中花11 cDNA文庫中篩選到多個水稻互作蛋白。
　　為研究avrRxo1在水稻條斑菌中致病性功能，本研究對其中的一個AvrRxo1互作蛋白的編碼基因

3、OsPSK4（編碼PP-PSK，psk-α前體蛋白）進行了轉基因功能研究。分別構建了OsPSK4基因的超量表達載體pCXUN-HA∷OsPSK4和抑制表達載體ds1301∷OsPSK4并通過農桿菌介導的遺傳轉化方法轉化水稻品種中花11。結果發(fā)現(xiàn)超量表達OsPSK4基因能夠顯著降低水稻對細菌性條斑病菌RS105的抗性水平，與野生型中花11對照植株相比，轉基因陽性株系接種RS105后的病斑長度要增長0.8-2.45cm。定量RT-PCR檢測

4、表達水平顯示，OsPSK4表達量在超量表達陽性植株中顯著升高，且RS105細菌數(shù)量相比野生型中花11植株也顯著增高，與增強感病的表型相一致;與之相反，抑制表達OsPSK4基因能夠顯著提高水稻對細菌性條斑病菌RS105的抗性水平，與野生型中花11對照植株相比轉基因陽性株系的病斑長度要縮短1.14-1.21cm，與熒光定量檢測靶標基因的表達結果相符。從而說明AvrRxo1互作蛋白OsPSK4在水稻對細菌性條斑病的抗性中起著負調控作用。

5、>　　為進一步驗證PSK介導的信號傳導在水稻對細菌性條斑病的抗性中起著負調控作用，本實驗通過基因檢索的方式從水稻中獲得疑似修飾OsPSK4基因成熟的同源基因OsTPST（編碼磺基轉移酶，修飾PP-PSK），并針對此基因構建了抑制表達載體ds1301∷OsTPST并成功進行了遺傳轉化。結果發(fā)現(xiàn)轉基因陽性植株中OsTPST表達量顯著受到抑制，而水稻對細菌性條斑病菌RS105的抗性水平則相應有所提高。與野生型中花11對照植株相比較，轉基因陽性

6、株系接種RS105后的病斑長度縮短0.89-1.18cm不等。表明OsTPST也在水稻對細菌性條斑病的抗性中起著負調控作用。根據擬南芥中同源基因介導的功能分析，OsTPST可能通過參與調控OsPSK4成熟，從而參與水稻對抗細菌性條斑病的調控。
　　綜上所述，本實驗鑒定了OsPSK4和Os TPST在水稻與條斑病菌互作過程中發(fā)揮負調控植物免疫的功能。初步解釋了AvrRxo1與OsPSK4蛋白的互作的生物學意義，暗示其可通過正向調控P