1、背景與目的：蛋白激酶CK2可通過TRAIL等途徑抑制凋亡，在多種腫瘤中活性增強(qiáng)，有可能成為一個(gè)新的抗腫瘤藥物靶點(diǎn)，但CK2各亞基在不同組織中的表達(dá)并不平衡。本研究通過檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)中 CK2 催化亞基α、α′和調(diào)節(jié)亞基β的表達(dá)水平，探討CK2表達(dá)與NSCLC 臨床病理的關(guān)系；并應(yīng)用RNA干擾技術(shù)沉默肺腺癌細(xì)胞A549中的CK2β亞基，探討下調(diào)CK2β對(duì)肺腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)和

2、增殖的影響。 方法：免疫組化SP法檢測(cè)35例石蠟包埋的NSCLC病灶組織及其癌旁組織和7例非腫瘤性肺組織標(biāo)本中CK2α、α′和β的表達(dá)；RT-PCR檢測(cè)10例新鮮的肺癌(lung cancer，LC)病灶組織及其癌旁組織和4例非腫瘤性肺組織標(biāo)本中CK2 各亞基mRNA 的表達(dá)，并用特異性底物測(cè)定細(xì)胞內(nèi)CK2的激酶活性；構(gòu)建 CK2B siRNA 表達(dá)質(zhì)粒pGPU6-CSNK2B，以與人編碼序列無同源性的通用陰性對(duì)照表達(dá)質(zhì)粒 pG

3、PU6-NC 作對(duì)照，分別用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法穩(wěn)定轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞。RT-PCR、Western blot、免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后CK2β的mRNA和蛋白表達(dá)水平，同位素參入法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)CK2活性，細(xì)胞計(jì)數(shù)法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，計(jì)算倍增時(shí)間，流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期，Hoechst 33258熒光染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡。 結(jié)果：免疫組化結(jié)果顯示CK2α和β在NSCLC 病灶組織中陽性率分別為62.9％、57.1％，顯著高于癌旁組織(11.

4、4％、25.7％；P<0.05)，也高于非腫瘤性肺組織(28.6％、42.9％；P>0.05)，CK2α′在NSCLC病灶組織中陽性率為65.7％，高于癌旁及非腫瘤性肺組織(42.9％、42.9％；P>0.05)；CK2各亞基的表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤 TNM 分期無關(guān)(P>0.05)，但在與細(xì)胞分化程度和組織分型的相關(guān)性方面，各亞基各有不同。CK2α′的表達(dá)與細(xì)胞的分化程度及組織分型無關(guān)；CK2α的表達(dá)與細(xì)胞的分化程度相關(guān)(r=0

5、.388，P<0.05)，與組織分型無關(guān)，在低分化組中CK2α的表達(dá)(91.7％)明顯高于中、高分化組(50％、42.9％；P<0.05)；而CK2β在肺鱗癌中的表達(dá)(81.3％)明顯高于腺癌(37.5％；P<0.05)，且與細(xì)胞的分化程度無關(guān)；另外，在NSCLC病灶組織中，無論是 CK2α還是CK2α′，均與 CK2β的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.439，P<0.05、r=0.45，P<0.05)。CK2各亞基mRNA表達(dá)水平均高于其相對(duì)正

6、常組織和非腫瘤良性病變組織。肺癌病灶組織CK2的活性約為其相對(duì)正常組織的5.4倍，非腫瘤良性病變組織的3.6倍。 將pGPU6-CSNK2B 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞后，胞漿中CK2β的mRNA水平、蛋白表達(dá)水平以及激酶活性均較轉(zhuǎn)染pGPU6-NC組和未轉(zhuǎn)染組明顯下降(P<0.05)，但各組間細(xì)胞核中CK2β的蛋白表達(dá)水平無明顯差異(P>0.05)；穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 pGPU6-CSNK2B組A549細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受到抑制，倍增時(shí)間為56h，

7、而未轉(zhuǎn)染細(xì)胞的倍增時(shí)間為39h(P<0.05)；周期分析結(jié)果證明，轉(zhuǎn)染pGPU6-CSNK2B 組細(xì)胞阻滯于G<,0>/G<,1>期；細(xì)胞形態(tài)學(xué)結(jié)果表明，CK2β siRNA可以誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡。 結(jié)論：蛋白激酶CK2在細(xì)胞的增殖中扮演重要角色，其高表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)；CK2α或β亞基可能是較α′亞基更為理想的生物標(biāo)志物；蛋白激酶CK2α和α′亞基在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)均與β亞基的表達(dá)正相關(guān)；CK2β特異