DKK1在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)分析及其與腫瘤惡性程度相關(guān)性的研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩44頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、目的: 分別從蛋白和基因水平,檢測DKK1在膠質(zhì)瘤細(xì)胞株/系、腫瘤患者組織、血清和腦脊液中的表達(dá)情況;分析DKK1表達(dá)程度與膠質(zhì)瘤級別的相關(guān)性。 方法: 細(xì)胞株/系:選用12株膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株/系(U251、SF767、SF295、T98G、MGR1、MGR2、MGR3、SKMG1、SKMG4、UWR7、UW28、SKI-N2)、髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞株D341和星形細(xì)胞瘤2級細(xì)胞系SHG44共14株膠質(zhì)瘤細(xì)胞株/系,

2、人腦星形膠質(zhì)細(xì)胞作為正常對照組。ELISA雙抗體夾心法檢測上述各細(xì)胞培養(yǎng)上清液和細(xì)胞裂解液中DKK1蛋白含量;半定量RT-PCR檢測上述各細(xì)胞中DKK1mRNA表達(dá)情況,t檢驗分析膠質(zhì)瘤細(xì)胞組和正常對照組之間DKK1表達(dá)差異; 腫瘤組織:收集膠質(zhì)瘤患者腫瘤組織,以腦外傷內(nèi)減壓切除組織為對照組,制成石蠟包埋組織和新鮮冰凍組織。采用免疫組織化學(xué)方法檢測石蠟包埋組織中DKK1蛋白含量,CMH卡方檢驗比較DKK1在膠質(zhì)瘤組與正常對照組之

3、間的表達(dá)差異,Kendall'tau-c相關(guān)性分析法檢驗DKK1表達(dá)與膠質(zhì)瘤級別的相關(guān)性;半定量RT-PCR檢測上述組織標(biāo)本中DKK1mRNA表達(dá)情況,t檢驗分析膠質(zhì)瘤組和正常對照組之間DKK1表達(dá)差異; 腦脊液和血清:收集膠質(zhì)瘤患者,神經(jīng)系統(tǒng)良性腫瘤患者(垂體瘤,腦膜瘤,神經(jīng)鞘瘤,聽神經(jīng)瘤等)的腦脊液和血清,以腦外傷患者的腦脊液和血清為對照組。ELISA雙抗體夾心法檢測各組腦脊液和血清中DKK1蛋白表達(dá)情況,t檢驗分析各組間D

4、KK1表達(dá)差異。 結(jié)果: 1.ELISA檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液和細(xì)胞裂解液結(jié)果: ①12株高級別膠質(zhì)瘤細(xì)胞株/系均有不同程度DKK1蛋白表達(dá),低級別膠質(zhì)瘤細(xì)胞系SHG44、髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞株D341均未見表達(dá);對照組人腦星形膠質(zhì)細(xì)胞和各細(xì)胞培養(yǎng)液中亦未見DKK1蛋白表達(dá)。高級別膠質(zhì)瘤細(xì)胞組中與低級別膠質(zhì)瘤細(xì)胞、正常對照組之間DKK1蛋白表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),低級別膠質(zhì)瘤細(xì)胞與正常對照組均無DKK1蛋白表

5、達(dá),差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05); ②高級別膠質(zhì)瘤細(xì)胞株/系組中,培養(yǎng)上清液中DKK1蛋白含量明顯高于細(xì)胞裂解液中DKK1蛋白含量,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 2.ELISA檢測腦脊液和血清中DKK1蛋白表達(dá)結(jié)果: ①腦脊液中,膠質(zhì)瘤組DKK1含量顯著高于神經(jīng)系統(tǒng)良性腫瘤組及正常對照組;神經(jīng)系統(tǒng)良性腫瘤組與正常對照組間無明顯差異; ②血清中,膠質(zhì)瘤組,神經(jīng)系統(tǒng)良性腫瘤組及正常對照組之間DKK1

6、含量均未見顯著性差異。 3.免疫組織化學(xué)檢測石蠟包埋腫瘤組織中DKK1蛋白表達(dá)結(jié)果①DKK1在膠質(zhì)瘤組織中的陽性表達(dá)率為(91.5%,43/47),在正常腦組織中陽性表達(dá)率為(18.1%,2/11);膠質(zhì)瘤組織中DKK1陽性表達(dá)水平高于正常腦組織; ②DKK1在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)與腫瘤病理分級呈正相關(guān)。 4.RT-PCR檢測DKK1mRNA表達(dá)結(jié)果: ①12株膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株/系的DKK1基因擴(kuò)增產(chǎn)物均

7、有一條230bp左右亮度不一的特異性條帶;低級別膠質(zhì)瘤細(xì)胞系SHG44、髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞株D341和正常對照組人腦星形膠質(zhì)細(xì)胞均未見特異性條帶; ②膠質(zhì)瘤組織中灰度值高于正常組織,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。 結(jié)論: 1.DKK1在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)顯著高于在正常人腦中的表達(dá): 2.在膠質(zhì)瘤中,隨著腫瘤級別的增高DKK1的表達(dá)程度亦增高; 3.膠質(zhì)瘤腦脊液中DKK1含量顯著高于神經(jīng)系統(tǒng)良性腫瘤組及

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論