1、研究背景及意義：肝細(xì)胞肝癌是第五大惡性腫瘤，也是第三大引起腫瘤相關(guān)性死亡的惡性腫瘤。肝細(xì)胞肝癌的發(fā)病率有著明顯的性別、地域差異，在我國(guó)是最常見的消化道腫瘤之一，我國(guó)的肝癌患者約占全球一半以上，已成為威脅我國(guó)人民生命健康的重要兇手。作為肝癌中最常見的一種病理類型，肝細(xì)胞性肝癌的發(fā)生機(jī)制比較復(fù)雜，是一個(gè)多因素、多途徑和長(zhǎng)期作用的結(jié)果。WNT信號(hào)通路是眾多肝癌發(fā)生發(fā)展過程研究中一個(gè)重要的方向，因?yàn)樗谀[瘤的發(fā)生、生長(zhǎng)、分化、遷移及凋亡中發(fā)揮了

2、重要的作用，其中最經(jīng)典的要數(shù)Wnt∕beta-catenin通路。DKK（Dickkopf）蛋白家族是一組分泌性糖蛋白，主要包括DKK-1,2,3,4四個(gè)成員。作為Wnt通路中的一種重要拮抗因子，DKK蛋白能夠調(diào)控Wnt信號(hào)通路的異常表達(dá)或激活，從而在肝癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。我們?cè)谘芯恐邪l(fā)現(xiàn)Dickkopf(DKK)4蛋白可能在正常肝臟組織及癌旁組織中高表達(dá)，而在肝癌組織中低表達(dá)，這提示DKK4的表達(dá)變化或許是肝細(xì)胞肝癌發(fā)生發(fā)展的重要

3、分子機(jī)制之一。因此，通過研究DKK4在肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)及其臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系有助于我們進(jìn)一步明確其發(fā)病機(jī)制，考察是否可以將其作為一種原發(fā)性肝癌的臨床標(biāo)志，并結(jié)合AFP提高肝癌的診斷率以及預(yù)后的判斷。
　　目的：研究Dickkopf(DKK)4在肝細(xì)胞肝癌組織中mRNA和蛋白水平的表達(dá)情況，以及DKK4與β—catenin在蛋白水平表達(dá)關(guān)系，探討DKK4蛋白表達(dá)與患者臨床病理特征及預(yù)后生存的關(guān)系，為進(jìn)一步分子機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)

4、，同時(shí)為將來(lái)提高患者早期肝癌和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移診斷率開辟一個(gè)新的途徑。
　　方法：45例新鮮肝癌組織及其癌旁組織標(biāo)本、10例正常肝臟組織標(biāo)本均取自上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院肝臟外科，采用Real time qPCR（探針法）檢測(cè)DKK4在上述組織中 mRNA水平表達(dá)情況；應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法（Immunohistochemistry，SP法）在上述組織中分別檢測(cè)DKK4和β-catenin蛋白表達(dá)情況，同時(shí)對(duì)組織芯片中224例肝癌患者

5、DKK4蛋白水平表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè)，以探討其與肝癌患者臨床病理特征間的關(guān)系，并通過相應(yīng)臨床隨訪分析DKK4蛋白表達(dá)情況與患者預(yù)后有無(wú)關(guān)系。
　　結(jié)果：Real time qPCR（探針法）結(jié)果顯示DKK4在肝癌組織中mRNA水平表達(dá)低于相應(yīng)的癌旁組織（P＜0.05）；這與性別、年齡、腫瘤大小、AFP、包膜完整與否、分化程度、血管侵潤(rùn)與否等無(wú)明顯相關(guān)性（P＞0.05），這一結(jié)果可能與樣本量較少有關(guān)。DKK4蛋白在肝癌組織表達(dá)也低于相

6、應(yīng)的癌旁組織（P＜0.05），而其正常肝臟組織中的表達(dá)高于其余兩者（P＜0.05），這與mRNA水平表達(dá)一致；β-catenin蛋白在肝癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為56.8％，癌旁組織中為31.8%，在肝癌組織中表達(dá)高于對(duì)應(yīng)的癌旁組織（p＜0.05），β-catenin蛋白與DKK4蛋白表達(dá)密切相關(guān)，呈負(fù)相關(guān)，r=﹣0.4，p=0.006。DKK4蛋白在腫瘤直徑≤5cm、有包膜的肝癌組織中的表達(dá)高于腫瘤直徑＞5cm（P=0.037）、無(wú)完整包膜

7、（P=0.025）的肝癌組織，DKK4蛋白表達(dá)與性別、年齡、是否合并肝硬化、腫瘤數(shù)目、腫瘤分化程度，血管侵潤(rùn)與否、TNM分級(jí)、AFP水平等無(wú)明顯相關(guān)性（P＞0.05）。DKK4高表達(dá)組與低表達(dá)組術(shù)后總生存時(shí)間的比較顯示：DKK4高表達(dá)組的累積術(shù)后總生存時(shí)間大于DKK4低表達(dá)組（P=0.03），中位生存時(shí)間分別為51月和39月，DKK4蛋白高表達(dá)肝癌患者預(yù)后生存時(shí)間長(zhǎng)于低表達(dá)者(P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：DKK4

8、mRNA和蛋白水平上肝細(xì)胞肝癌組織中低表達(dá)，而在癌旁組織及正常肝臟組織中高表達(dá)；β-catenin蛋白在肝癌組織中高表達(dá)，并且與DKK4蛋白表達(dá)密切相關(guān)，呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，DKK4高表達(dá)可能影響β-catenin在細(xì)胞核的積累，這與Wnt信號(hào)通路中DKK4作用機(jī)制相一致；DKK4蛋白高表達(dá)肝癌患者預(yù)后生存時(shí)間長(zhǎng)于低表達(dá)者；DKK4蛋白水平的表達(dá)水平與患者腫瘤大小、有無(wú)包膜具有相關(guān)性，這些說明DKK4可能是一種抑癌基因，有可能在腫瘤的增殖與轉(zhuǎn)