1、南方醫(yī)科大學碩士學位論文RNA干擾EGFR基因?qū)侨饬黾毎绊懙膶嶒炑芯啃彰黑w成利申請學位級別：碩士專業(yè)：病理學指導教師：李祖國20070420中文摘要的級聯(lián)放大反應(yīng)，從而調(diào)控和傳遞骨肉瘤的生物學行為的信號。研究發(fā)現(xiàn)EGFR在人骨肉瘤組織中過表達，且其表達水平和惡性預后相關(guān)，EGFR抑制劑有望被開發(fā)成為骨肉瘤的嶄新治療途徑【3羽。RNA干擾(RNAi)是由雙鏈RNA(dsRNA)引發(fā)的轉(zhuǎn)錄后基因沉默機制(PTGS)，dsRNA經(jīng)RNA

2、沉默復合體(RISC)降解成2123nt的小片段(siRNA)，并以其為模板，特定位點、特定間隔降解與之序列互補的mRNA，目前已成功用于基因功能和信號傳遞系統(tǒng)上下游分子相互關(guān)系的研究。本研究擬通過采用RNAi技術(shù)，探討利用體外化學合成siRNA和構(gòu)建質(zhì)粒載體的方法是否能有效沉默骨肉瘤細胞EGFR基因表達，阻斷EGFR所介導的惡性生物學行為，從而為骨肉瘤的基因治療提供新策略。目的探討采用RNAi技術(shù)是否能有效抑制骨肉瘤MG63細胞株EG

3、FR表達，以及EGFR基因下調(diào)后骨肉瘤MG63細胞生物學特性的改變，以期為腫瘤治療提供新的思路和實驗依據(jù)。材料與方法首先通過免疫組化、RTPCR和westernblot測定MG63細胞株EGFR的表達情況。體外合成短發(fā)夾狀shRNA—EGFR單鏈，并通過退火、回收、質(zhì)粒酶切、連接、轉(zhuǎn)化、挑克隆、提質(zhì)粒、測序等步驟，構(gòu)建和鑒定重組質(zhì)粒載體psilencer21shRNAEGFR，轉(zhuǎn)染MG63細胞株。建立實時熒光定量RTPCR定量檢測EGF