1、脂肪酶(Lipase，EC3.1.1.3，甘油酯水解酶)是分解脂肪的酶。在動(dòng)植物體和微生物中普遍存在，它是一類特殊的酯鍵水解酶，催化如下反應(yīng)：甘油三酯+水=甘油+游離脂肪酸。脂肪酶被廣泛應(yīng)用于酯合成、手性化合物的拆分、化工合成中間體的選擇性基因保護(hù)、高聚物的合成、肽合成等方面，應(yīng)用前景十分廣闊。 本文比較了不同菌株脂肪酶拆分α-苯乙醇的能力，并對(duì)解脂假絲酵母脂肪酶的拆分條件、菌株產(chǎn)酶條件、酶的初步純化和性質(zhì)進(jìn)行了研究。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)

2、果如下： 1、可拆分α-苯乙醇菌株的篩選從土樣和水樣中篩選得到47株產(chǎn)脂肪酶的菌株，加上實(shí)驗(yàn)室保存的3株產(chǎn)脂肪酶菌株，構(gòu)建了產(chǎn)脂肪酶菌庫(kù)。對(duì)菌庫(kù)中的菌株進(jìn)行脂肪酶酶活的初篩，篩選出16株酶活相對(duì)較高的菌株進(jìn)行拆分α-苯乙醇的復(fù)篩。確定高酶活、拆分能力較好的解脂假絲酵母(Candida lipolytica)作為進(jìn)一步研究的出發(fā)菌株。 2、α-苯乙醇拆分條件的研究論文對(duì)解脂假絲酵母所產(chǎn)脂肪酶在苯乙醇的拆分中進(jìn)行了研究。確定

3、了拆分反應(yīng)的最佳條件：以二氯甲烷作為有機(jī)溶劑，反應(yīng)體系為4mL，底物濃度：苯乙醇為0.6mol/L，乙酸乙烯酯為1.2mol/L，反應(yīng)溫度為40℃，酶量為0.2g，搖床轉(zhuǎn)速為220r/min，反應(yīng)時(shí)間為72h。經(jīng)過(guò)優(yōu)化，底物的總轉(zhuǎn)化率由優(yōu)化前的36.1％提高到45.2％，底物R-轉(zhuǎn)化率由61.9％提高到了85.4％，底物S-轉(zhuǎn)化率由9.8％降低到了4.15％，底物的e.e.值由39.6％提高到了70.2％，產(chǎn)物的e.e.值由73.3％提

4、高到了95.1％，E值由9.5提高到了83.9，拆分效果經(jīng)過(guò)優(yōu)化有了大幅度的改進(jìn)。 3、解脂假絲酵母菌株產(chǎn)酶發(fā)酵條件的優(yōu)化通過(guò)逐因子實(shí)驗(yàn)、Plackett-Burman設(shè)計(jì)、響應(yīng)面法三種優(yōu)化方法的結(jié)合，對(duì)解脂假絲酵母的產(chǎn)酶條件進(jìn)行優(yōu)化。優(yōu)化后的發(fā)酵條件為：葡萄糖0.25％，蛋白胨0.60％，K<,2>HPO<,4> 0.603％，KH<,2>PO<,4> 0.10％，MgSO<,4>·7H<,2>O 0.05％，橄欖油0.50％

5、，吐溫-80 0.50％，初始pH值為7.85，轉(zhuǎn)速為180 r/min，28℃培養(yǎng)48h。酶活高達(dá)208.9U/mL，是初始酶活91.3 U/mL的2.29倍。 4、解脂假絲酵母脂肪酶的酶學(xué)性質(zhì)研究對(duì)酶液進(jìn)行了酶學(xué)性質(zhì)的研究。研究發(fā)現(xiàn)，該酶的最佳反應(yīng)溫度為40℃，最適pH為8.0。該酶在50℃以下，pH6-8的范圍內(nèi)穩(wěn)定性比較好。Zn<'2+>、Mg<'2+>、K<'+>等離子對(duì)酶活有促進(jìn)作用，Cu<'2+>、EDTA對(duì)酶活有