1、食管腺癌（Esophageal Adenocarcinoma，EAC）發(fā)生率的增長速度居各種癌腫的第二位，目前認為Barrett食管（Barrett's Esophagus，BE）是食管腺癌的一種癌前病變，近年來的研究表明，BE的發(fā)病率呈逐年增加的趨勢，并且由BE轉化而來的食管腺癌的發(fā)病率也明顯增加，亞洲國家的BE和食管腺癌雖不如西方國家常見，但近年來的流行病學資料顯示也呈增加的趨勢，食管腺癌早期即可發(fā)生淋巴和遠處器官的轉移，血管的形成

2、是促進腫瘤發(fā)生轉移和為腫瘤的進一步生長提供營養(yǎng)所必須的，但是在食管腺癌的發(fā)生發(fā)展中，新生血管形成的機制目前還不是十分清楚。
　　 血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是血小板源性生長因子（PDGF）家庭的一個成員，是腫瘤誘導產(chǎn)生新生血管的最主要的細胞因子，是目前已知的最強的促進血管生成的因子，VEGF在腫瘤組織中特異的作用于血管內(nèi)皮細胞，促進細胞的有絲分裂和增殖，從而

3、促進瘤體血管的新生，并加速腫瘤生長，提高血管通透性，使腫瘤細胞更易于侵入和穿透血管，實現(xiàn)腫瘤的浸潤和轉移。在食管腺癌的生長和轉移過程中，VEGF在調(diào)節(jié)血管生成中起重要作用。食管腺癌中VEGF是高表達的，但VEGF是如何被激活的及激活的機制目前未見有關報道。
　　 絲裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinases，MAPK）是細胞外各種信號從細胞表面轉導到細胞核內(nèi)部的重要傳遞者。目前認為，MA

4、PK信號轉導通路在細胞增殖、分化、凋亡、血管發(fā)生及腫瘤轉移中發(fā)揮著重要作用，其成員p38MAPK是一種重要的細胞內(nèi)信號轉導通路。越來越多的研究表明，VEGF在許多惡性腫瘤例如肝癌、食管鱗癌等中的表達與p38MAPK信號轉導通路有關。
　　 表皮生長因子（epidermal growth factor，EGF）不僅能夠促進細胞增殖和抑制細胞凋亡，在組織損傷修復和腫瘤形成中發(fā)揮重要作用，而且還能誘導腫瘤細胞發(fā)生遷移，與腫瘤浸潤和轉移

5、密切相關。表皮生長因子能與細胞膜上表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）結合使其磷酸化，再經(jīng)MAPK信號通路將信號傳遞至核內(nèi)，促進或抑制特定靶基因的表達，調(diào)節(jié)細胞的黏附和運動。有研究表明，在多種腫瘤如食管癌、胃癌、肝細胞癌、大腸癌等中EGF和VEGF均高表達，并且兩者的表達呈正相關；體外培養(yǎng)的多種細胞系中，EGF可通過上調(diào)VEGF的表達而促進腫瘤血管生成。在食管腺癌的發(fā)生發(fā)展中，是

6、否有EGF通過激活p38MAPK信號轉導通路以致激活VEGF而導致腫瘤發(fā)生轉移的相關資料未見報道。
　　 本研究從EGF著手，通過對p38MAPK信號轉導通路的特異性阻斷，研究p38MAPK信號轉導通路在EGF誘導食管腺癌（SEG-1）細胞表達VEGF中的作用，探討食管腺癌細胞轉移中血管形成的機制。
　　 目的：通過研究p38MAPK信號轉導通路在EGF誘導食管腺癌（SEG-1）細胞表達VEGF中的作用，探討食管腺癌細胞

7、轉移中血管形成的機制。
　　 方法：采用體外細胞培養(yǎng)技術培養(yǎng)食管腺癌（SEG-1）細胞，以相同濃度EGF（100ng/ml）按不同的時間梯度刺激細胞，應用RT-PCR方法檢測VEGF mRNA，Western blot法測定各時間點總p38MAPK、磷酸化p38MAPK、VEGF蛋白表達情況。并用p38MAPK特異抑制劑SB203580預處理細胞后，觀察上述指標變化。
　　 結果：
　　 1 EGF對SEG-1細

8、胞p38MAPK蛋白表達的影響：Western blot結果顯示，大約在43KD位置出現(xiàn)p38MAPK特異性條帶。EGF作用于SEG-1細胞后p38MAPK磷酸化程度有所升高，且p38MAPK磷酸化程度隨EGF作用時間的變化而變化，1h、6h、12h、24h、48h的p38MAPK磷酸化的百分比分別為13.1％、31.2％、40.7％、53.5％、42.3％，可見24h的p38MAPK磷酸化水平最高，因此，認為該時間點為p38MAPK最

9、大磷酸化時間點。
　　 2 EGF對SEG-1細胞VEGF mRNA和蛋白表達的影響：RT-PCR檢測VEGF mRNA結果顯示：SEG-1細胞中有VEGF基因表達，并且隨著EGF作用時間的延長，VEGFmRNA的表達水平逐漸上升，EGF作用于SEG-1細胞6h、12h、24h、48h后，VEGF mRNA表達分別為：0.494±0.034、0.728±0.067、0.948±0.046、0.806±0.059，與正常對照組（0

10、.357±0.011）相比，VEGF mRNA表達升高，有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。VEGF mRNA表達明顯升高后逐漸下降，于24h達高峰。Western blot檢測VEGF蛋白結果顯示：EGF刺激前SEG-1細胞VEGF蛋白表達量較低，刺激后1h開始上升，持續(xù)至24h達最高，呈明顯的時間依賴性。EGF作用于SEG-1細胞1h后，VEGF蛋白表達為0.431±0.031，與正常對照組（0.390±0.028）相比，無統(tǒng)計學意義（p

11、>0.05）。EGF作用于SEG-1細胞6h、12h、24h、48h后，VEGF蛋白表達分別為：0.484±0.042、0.794±0.031、1.000±0.024、0.869±0.023，與正常對照組相比，有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。
　　 3 p38MAPK特異抑制劑SB203580處理SEG-1細胞：20μmol/L的SB203580可明顯抑制EGF誘導的p38MAPK激酶活力。SB203580對EGF誘導的SEG-1

12、細胞內(nèi)VEGFmRNA和蛋白的表達亦有明顯的抑制作用，而且隨著SB203580濃度的升高，抑制作用更加明顯，呈明顯的濃度依賴性。
　　 結論：
　　 1 EGF可以引起p38MAPK磷酸化，在相同濃度EGF（100ng/ml）作用下，p38MAPK的磷酸化呈時間依賴性，最大磷酸化作用時間點為24h。
　　 2 相同濃度EGF（100ng/ml）可以明顯增強SEG-1細胞VEGF mRNA和蛋白的表達，呈時間依賴性