1、目的：通過將增殖能力較強的青年期兔角膜緣干細胞(limbalstemcell,LSCs)[1]原代培養(yǎng)，擴增后探索適宜的種植細胞密度。將其種植于同種異體晶狀體前囊膜上，探討晶狀體前囊膜為角膜緣干細胞培養(yǎng)載體潛在價值，為組織工程化角膜上皮載體選擇提供新的載體材料。
　　方法：（1）用酶消化法將增殖能力較強的青年兔角膜緣組織制備成細胞懸液培養(yǎng)，原代培養(yǎng)后將傳代細胞（2代），用含10％胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)液將其制備成1.0×1

2、06、1.0×105、1.0×104個細胞/ml的細胞懸液。將其接種于48孔培養(yǎng)板，觀察在基礎(chǔ)培養(yǎng)條件一定的情況下傳代（2代）培養(yǎng)角膜緣干細胞的生長情況，48h檢測其細胞貼壁率并記錄細胞融合時間；CCK-8法檢測增殖活性。（2）以適宜細胞密度將其種植于同種異體兔晶狀體前囊膜上，對照組無為無載體培養(yǎng)，DMEM:F12為基礎(chǔ)培養(yǎng)液，觀察在其上的生長情況，免疫熒光法檢測角膜緣細胞的△Np63、角蛋白K3表達，運用SPSS18.0統(tǒng)計軟件對所獲

3、數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果：（1）在基礎(chǔ)培養(yǎng)條件一定的情況下，以1.0×104個細胞/ml接種48h換液，懸浮細胞較多，可見少數(shù)細胞貼壁生長，細胞貼壁率低和融合成單層時間長，與其他兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.001）。以1.0×106和1.0×105個細胞/ml接種，48h貼壁細胞明顯增多。貼壁率分別為86.84±7.04和74.52±6.16；細胞融合成單層時間分別是6.02±0.52和7.06±0.46;兩組間比較差異

4、無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。CCK-8法生長曲線顯示，以1.0×105個細胞/ml細胞密度接種，細胞有較強的增殖活性，細胞密度過高過低在有限的培養(yǎng)條件下都會對細胞增殖產(chǎn)生影響。（2）同種異體晶狀體前囊膜為載體，角膜緣干細胞可貼壁生長，細胞形態(tài)呈圓形、橢圓形和多邊形，細胞間連接緊密。約7天左右可形成細胞植片。免疫熒光染色△Np63大部分細胞呈陽性，角蛋白K3少量細胞表達；隨著培養(yǎng)時間的延長△Np63表達量下降，角蛋白K3表達量上升，與對